论文部分内容阅读
【目的】观察Notch1、VEGF、MVD与肾透明细胞癌临床病理特征的关系。研究干扰沉默Notch1基因后，肾透明细胞癌786-0细胞株增殖、凋亡的变化及Akt信号通路的改变。【方法】（1）免疫组化S-P法检测52例肾透明细胞癌Notch1、VEGF、MVD的表达水平，癌旁肾组织及30例正常肾组织为对照。（2）构建Notch1基因的小干扰RNA片段，经LipofectamineTM2000脂质体转染786-0细胞，RT-PCR的方法鉴定干扰效果。（3）应用MTT法绘制细胞生长曲线，观察RNA干扰沉默Notch1基因后肾透明细胞癌786-0细胞增殖的变化；TUNEL法分析细胞的凋亡。（4）WesternBlot检测干扰沉默Notch1基因后Notch1蛋白、凋亡相关蛋白Bcl-2、Pro-caspase3和Akt信号通路相关蛋白T-Akt、p-Akt、p-mTOR、p-P70S6K的表达。【结果】（1）Notch1、VEGF在肾透明细胞癌表达阳性率分别为82.69%、92.30%，显著高于癌旁肾组织（42.55%，40.42%）及正常肾组织（16.67%，20.00%）, P<0.01。肾透明细胞癌MVD为（64.24±12.35），显著高于癌旁肾组织（32.48±11.74）及正常肾组织（20.37±10.82），P<0.01。Notch1、VEGF、MVD均与肾癌细胞Fuhrman分级、肿瘤大小及TNM分期相关，且Notch1与MVD、VEGF与MVD之间呈正性相关。（2）Notch1siRNA可以下调Notch1mRNA和Notch1蛋白的表达。（3）干扰沉默Notch1基因后肾透明细胞癌786-0细胞增殖受到抑制，细胞凋亡率增加。Notch1siRNA能下调凋亡相关蛋白Bcl-2、Pro-caspase3的表达。（4）干扰沉默Notch1基因能下调肾透明细胞癌786-0细胞p-Akt、p-mTOR、p-P70S6K的表达，但T-Akt水平未见明显改变。【结论】Notch1、VEGF、MVD在肾透明细胞癌中有异常高表达，Notch1与VEGF可能共同参与调控肿瘤新生血管的形成。Notch1、VEGF、MVD可能与肾透明细胞癌的预后有关。干扰沉默Notch1基因可以下调凋亡相关蛋白Bcl-2、Pro-caspase3的表达，抑制786-0细胞增殖，诱导细胞凋亡；沉默Notch1基因可通过抑制Akt通路的磷酸化下调该信号通路的活性，提示Notch1基因可能在肾透明细胞癌的发生、发展中起重要作用。Notch1基因可能成为肾透明细胞癌基因治疗的新靶点。