蒙药嘎日迪散对UC模型大鼠肠道菌群失衡的调节研究

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溃疡性结肠炎(ulcerative colitis, UC)是一种原发性,慢性的直肠和结肠黏膜疾病,被世界卫生组织列为现代难治病之一。近年,UC的发病率逐年提高,严重的影响人类的健康和生活质量。目前对UC的治疗,西医主要是抗炎和免疫抑制,不仅副作用大,而且缓解率较低、复发率高;传统中医多是复方煎剂和/或进行灌肠治疗,治疗效果较好,但病人依从性差,不易较长时间应用,而蒙医药对慢性肠病治疗具有悠久的历史和较好的疗效,课题组长期临床观察发现,特色蒙药嘎日迪散(野罂粟、阿给)口服给药对UC具有良好的功效,毒副作用低,愈后基本无复发。本研究将以传统蒙医药理论和应用背景为参考依据,采用现代分离、分析技术从蒙药阿给及野罄粟中提取、分离出有效部位,并研究嘎日迪散对UC模型大鼠肠道菌群失衡的调节作用。实验方法:1.嘎日迪散有效部位的提取方法优化(1)因素和水平的确定:选取不同浓度乙醇(A)、加入溶剂的倍量(B)、回流提取时间(C)和提取次数(D)为主要因素,每个因素各设置3个水平。(2)总生物碱和总黄酮含量测定:采用紫外-可见光分光光度法测定提取液中总黄酮的含量;采用非水滴定/电位滴定法测定提取液中总生物碱含量,采用LC-MSn法确定所提取总生物碱的生物碱种类。2.嘎日迪散对UC模型大鼠肠道菌群失衡的调节研究以肠道细菌16SrRNA为分子靶标,以大鼠结肠内容物中分离的总DNA为模板,采用T-RFLP结合毛细管电泳绘制肠道菌群指纹图谱,探讨肠道菌群变化与UC发病的关系,揭示嘎日迪散对肠道菌群失衡的调节作用。实验结果:1.采用22倍体积的70%乙醇回流提取一次,5h为嘎日迪散最佳提取方案。2.多样性指数结果显示,HaeⅢ酶切样品微生物多样性高于HhaⅠ、MspⅠ酶切。3.单因素方差分析结果表明,7组间差异有统计学意义的菌群有盐单胞菌属(Halomonas sp. wp29)、酸杆菌门(uncultured Acidobacteria bacterium XB3A1)、放线细菌属(uncultured actinobacterium NLS2.9)以及其它三种细菌(uncultured bacterium<T-RF:102bp>, uncultured bacterium JH-WH31, uncultured bacterium W23)。结论:1.本实验按照正交设计方法,分别以可见光分光光度法、非水滴定法并结合LC-MSn,对嘎日迪散有效部位的提取方法进行优化。综合考虑实际实验成本,最终确定22倍体积的70%乙醇回流提取一次,5h为嘎日迪散最佳提取方案。2.UC模型大鼠肠道菌群的失衡与盐单胞菌属(Halomonas sp. wp29)、未纯培养细菌(uncultured bacterium W23)密切相关。嘎日迪散通过调节UC模型大鼠肠道内盐单胞菌属(Halomonas sp. wp29)、细菌(uncultured bacterium W23)、酸杆菌门(uncultured Acidobacteria bacterium XB3A1)、放线细菌属(uncultured actinobacterium NLS2.9)以及细菌(uncultured bacterium JH-WH31)的定植,维持UC模型大鼠肠道菌群的平衡。
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