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目的： 探究过表达微小RNA（microRNA-7，miRNA-7）抑制鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma，NPC)5-8F细胞恶性生物学行为活动及其与EGFR/PI3K/Akt信号传递通路的关联情况。 方法： 1、5-8F细胞的培养和细胞转染及细胞转染效率的检测 培养鼻咽癌5-8F细胞株，应用Lipo2000进行转染，24h后测算各实验组的转染情况。分miRNA-7组、NC组及Mock组3个实验组。 2、RT-PCR检测转染后miRNA-7的表达 利用qRT-PCR实验法检测转染24h后，miRNA-7在各组5-8F细胞中的对应表达量。 3、CCK-8法检测细胞增殖能力 转染各组5-8F细胞，采用CCK-8实验法来分别检测各实验组鼻咽癌5-8F细胞株的增殖受抑制情况。 4、平板克隆实验法检测5-8F细胞克隆形成情况 培养鼻咽癌5-8F细胞，转染后运用平板克隆实验法检测各组鼻咽癌5-8F细胞克隆形成能力的改变情况。 5、Hoechst33258染色实验法检测各实验组5-8F细胞凋亡情况 转染各组鼻咽癌5-8F细胞，并选用Hoechst33258荧光染色实验法处理各实验组5-8F细胞，分别观测转染后各实验组细胞的凋亡变化情况。 6、Transwell法检测各组细胞迁移 利用Transwell小室实验法来分别检测经转染处理后的各组鼻咽癌5-8F细胞的细胞迁移能力的变化情况。 7、RT-PCR检测EGFR/PI3K/Akt信号通路各成员mRNA的表达 利用qRT-PCR实验法分别检测转染miRNA-7模拟物对各组5-8F细胞EGFR/PDK/Akt信号传递通路各成员mRNA表达量改变的影响。 8、Western blot检测各蛋白表达情况 使用Western blotting实验技术来分别检测转染miRNA-7模拟物对各组5-8F细胞EGFR/PI3K/Akt信号通路各家族成员蛋白表达量改变的影响。 9、统计学分析 结果选用SPSS19.0进行分析。以均数±标准差(mean±SD)来表示计量资料，运用单因素方差分析(ANOVA)对结果进行检验，组间采用LSD法进行两两比较。以P＜0.05为差异具有统计学意义。 结果： 1、细胞转染情况 转染带有Cy3荧光蛋白的Cy3-NC或Cy3-miRNA-724 h后，观察到转染效率在85％左右。 2、miRNA-7在5-8F细胞中的表达情况 miRNA-7在miRNA-7组、NC组及空白对照组中相对表达量分别为677±4.58、1.08±0.01和0.99±0.02，miRNA-7组相对NC组及Mock组呈明显上调(P＜0.01)。 3、miRNA-7对5-8F细胞增殖抑制情况 miRNA-7组、NC组及Mock组的A值分别为0.74±0.02、0.93±0.02和0.95±0.01，miRNA-7组的A值与另外两组相比，有显著性差异(P＜0.01)。 4、miRNA-7对5-8F细胞平板克隆形成能力的影响 miRNA-7组克隆斑形成数量与NC组和Mock组相比明显减少，细胞的克隆形成能力受到明显的抑制。 5、miRNA-7对5-8F细胞凋亡形成的影响情况 Mock和NC组鼻咽癌5-8F细胞经Hoechst33258染色后可见细胞核大小较均一，呈现椭圆形或者圆形，细胞核内的染色质分布较均匀，细胞呈现为淡蓝色荧光团;而miRNA-7组细胞内部可见核染色质聚集成块且分布较不均匀，呈团块样分布，有些细胞核明显皱缩减小，有的细胞核碎裂呈小团块样，大量的凋亡期细胞出现，可见亮蓝色的细胞核固缩和碎裂分叶状细胞核。 6、miRNA-7改变5-8F细胞迁移能力的情况 细胞迁移实验结果显示miRNA-7组OD值为0.36±0.01，NC组为0.59±0.02，Mock组为0.61±0.02，miRNA-7组与NC组及空白对照组OD值差异显著(P＜0.01)。 7、miRNA-7对EGFR、PI3K及AKT的mRNA表达的影响 RT-PCR检测结果显示miRNA-7组EGFR、PI3K及AKT的表达量相对于Mock组分别为0.66±0.04、0.65±0.02和0.76±0.03，而NC组则为0.95±0.02、0.91±0.03和0.93±0.02，方差分析结果显示miRNA-7组5-8F细胞中EGFR/PI3K/AKT通路各成员的mRNA表达量与NC组和Mock组相比均明显下调，差异具有显著性意义(P＜0.01)。 8、miRNA-7对EGFR/PI3K/AKT通路各蛋白表达的影响 Western Blot实验结果显示miRNA-7组EGFR、p-EGFR、PI3K、AKT及p-AKT的相对内参的表达量分别为0.37±0.03、0.27±0.02、0.10±0.01、0.19±0.02和0.09±0.01，NC组为0.68±0.02、0.56±0.03、0.26±0.02、0.61±0.01和0.45±0.03，Mock组则分别为0.73±0.02、0.53±0.01、0.24±0.01、0.62±0.02和0.41±0.01，应用ANOVA进行分析统计，结果表明miRNA-7组5-8F细胞中EGFR/PI3K/AKT传递通路各成员的蛋白表达量与NC组和Mock组相比均显著减少，差异具有显著性意义（P＜0.01）。 结论： 1、各实验组鼻咽癌5-8F细胞转染效率在85％作用，且转染后miRNA-7明显上调，并在细胞内呈现过表达状态。 2、转染过量miRNA-7后，鼻咽癌5-8F细胞的增殖、平板克隆及迁移能力受到明显抑制，而其凋亡过程却加速进展。 3、过表达的miRNA-7，可以使鼻咽癌5-8F细胞中EGFR/PI3K/AKT信号传递通路各主要相关成员EGFR、PI3K及AKT的mRNA及蛋白表达量均明显下调。 4、转染NC无关序列后，鼻咽癌5-8F细胞无论是细胞增殖能力、细胞平板克隆能力、细胞迁移能力及细胞凋亡均未受明显影响。