近年来随着易感人群的增加，烟曲霉感染的发病率呈现不断上升趋势。即使目前抗真菌药物研究取得很大进步，且临床诊疗水平不断提高，但侵袭性曲霉病（invasiveaspergillosis，IA）的病死率仍高达50%～90%。烟曲霉感染的研究证明，机体免疫状态是宿主发病的重要因素。随着研究的不断深入，模式识别受体（pattern recognitionreceptors，PRRs）在机体免疫调节中的作用日渐受到重视。人们认识到PRRs对病原体相关分子模式（pathogen-associated molecular patterns，PAMPs）的识别是宿主抗真菌免疫的始动环节。深入研究PRRs的作用及其调节机制，为从干预宿主免疫状态角度找到曲霉病防治新思路提供了可能。在抗真菌免疫中，Dectin-1是起主要作用的PRRs之一。Dectin-1是一种糖基化Ⅱ型跨膜受体，属于C型植物凝集素家族，主要通过识别β-(1,3)葡聚糖介导宿主抗真菌免疫防御反应。在烟曲霉感染中Dectin-1通过识别烟曲霉胞壁的β-(1,3)葡聚糖成份促进机体的保护性应答反应，包括对烟曲霉的摄取及杀伤（通过呼吸爆发介导），产生大量的细胞因子和趋化因子，包括肿瘤坏死因子（TNF）、白细胞介素1（IL-1）、白细胞介素6（IL-6）以及粒细胞-单核细胞集落刺激因子（GM-CSF）等。深入了解烟曲霉感染中Dectin-1的调节及作用机制，对研究烟曲霉发病及临床防治具有重要意义。本研究通过建立烟曲霉感染的体外模型，观察Dectin-1在烟曲霉感染后的表达变化，并通过siRNA沉默技术在不同水平评价Toll样受体2（TLR2）、转录因子PU.1对Dectin-1表达调控的影响。第一部分烟曲霉感染时TLR2对Dectin-1表达的影响目的：建立烟曲霉感染人支气管上皮细胞（human bronchial epithelial cells，HBE细胞）的体外模型，观察Dectin-1、TLR2表达变化以及二者之间的关系，为进一步研究不同PRRs之间的协同机制提供依据。方法：①烟曲霉孢子感染HBE细胞，感染复数（multiplicity of infection，MOI）为1。分别在0、6、18、24h终止感染，提取细胞总RNA、总蛋白，通过Western Blot、PCR方法分别在蛋白、mRNA水平上检测Dectin-1和TLR2的表达情况；②沉默TLR2，复制感染模型，通过Western Blot及流式细胞技术观察Dectin-1的表达变化。结果：①HBE细胞感染烟曲霉孢子6h后，Dectin-1的mRNA表达水平显著升高，差异具有统计学意义（P<0.05），在感染后24h仍维持在较高水平；在HBE细胞静息状态下Dectin-1蛋白基础表达水平较低，与初始状态相比，感染后6h表达量增加11倍（P<0.01）。②TLR2的mRNA和蛋白在静息状态下的HBE细胞中即有较高水平表达，随着感染时间的延长，其蛋白表达水平有增高的趋势，但与静息状态下表达水平相比差异无统计学意义（P>0.05）。③沉默TLR2，在烟曲霉感染18h时，HBE细胞中Dectin-1的表达受到显著抑制，差异具有统计学意义（P<0.05）。结论：在烟曲霉感染中，HBE细胞内Dectin-1表达增强，而TLR2表达无明显变化；TLR2对Dectin-1的表达有协同作用，可能参与其上调表达过程，但具体的调节机制还不清楚。第二部分烟曲霉感染时转录因子PU.1对Dectin-1的调节作用目的：构建THP-1（人急性白血病单核细胞株）巨噬细胞烟曲霉感染模型，探讨烟曲霉感染时转录因子PU.1对THP-1巨噬细胞吞噬作用的影响和Dectin-1转录水平的调节作用。方法：①烟曲霉孢子感染THP-1巨噬细胞，MOI=1。分别在0、12、24h终止感染，提取细胞总蛋白，通过Western Blot方法检测PU.1蛋白表达情况；②沉默PU.1，复制THP-1巨噬细胞感染模型，Western Blot评价Dectin-1表达变化情况，激光共聚焦显微镜观察其对烟曲霉孢子吞噬能力的变化。结果：THP-1巨噬细胞在静息状态下能够表达转录因子PU.1，随着感染时间的延长其表达量逐渐增加，差异具有统计学意义（P<0.05）；转录因子PU.1沉默后，在烟曲霉感染12h时，THP-1巨噬细胞中Dectin-1的表达显著抑制，差异具有统计学意义（P<0.05）；转录因子PU.1沉默后，THP-1巨噬细胞对静息期、肿胀期烟曲霉孢子的吞噬能力下降。结论：在烟曲霉感染时转录因子PU.1表达上调，这影响了THP-1巨噬细胞的吞噬功能并可能在转录水平参与调控Dectin-1的表达，但是二者之间是否存在直接联系还需要进一步研究证实。