作为珍贵的食药真菌,虎奶菇除了富含蛋白质、多糖外,还含有钾、钙、镁等元素,具有药用性能,生态价值和经济价值。氧化应激对易受外界环境胁迫的虎奶菇会产生不利的影响,因此,它已经进化出一系列抗氧化机制来清除活性氧（Reactive oxygen species,ROS）。超氧化物歧化酶（Superoxide dismutases,SOD）可以清除如超氧阴离子的活性氧,保护细胞免受氧化应激。对虎奶菇中SOD进行异源表达和研究虎奶菇中SOD的功能,在分子水平上对虎奶菇中SOD进行体外和体内的研究,既为真菌来源的SOD的规模化提取和理化性质研究奠定基础,又为深入了解虎奶菇的抗性机理提供理论依据。主要研究结果如下:1.虎奶菇中Mn-SOD基因克隆研究用H2O2鉴定虎奶菇中SOD主要是Mn-SOD。通过同源克隆、RACE技术和FPNI-PCR等方法从虎奶菇中克隆获得一个锰超氧化物歧化酶基因PtMn-SOD,其DNA序列全长1025 bp,cDNA序列全长747 bp,ORF全长为663 bp,具有七个内含子,编码220个氨基酸。PtMn-SOD与糙皮侧耳PoMn-SOD序列同源性达到89%。PtMn-SOD蛋白在线粒体内发挥功能,参与超氧阴离子的清除反应。2.虎奶菇中Mn-SOD异源表达研究构建了虎奶菇PtMn-SOD基因的异源表达载体,并转入大肠杆菌BL21（DE3）中。SDS-PAGE分析,在IPTG诱导下有目的蛋白条带产生,表明重组蛋白28a-PtMn-SOD/BL21成功表达。重组蛋白少部分以可溶的形式表达,并对以可溶的形式表达的蛋白进行纯化,通过非变性PAGE胶活性染色和测定酶活力,表明虎奶菇PtMn-SOD基因在大肠杆菌BL21（DE3）中成功表达,且重组酶有生物活性。3.虎奶菇中Mn-SOD基因过表达菌株和RNA干涉菌株的构建及其抗逆性研究构建了PtMn-SOD基因的过表达载体和RNA干涉载体,利用根癌农杆菌的介导作用,遗传转化虎奶菇菌丝体。通过PCR、荧光显微镜观察和实时荧光定量PCR验证,成功获得PtMn-SOD基因过表达和RNA干涉的转化菌株。在高H2O2、高NaCl和低温的胁迫试验中,过表达菌株生长速度均比野生型菌株和RNA干涉菌株要快,表明过表达菌株更易于生长。PtMn-SOD基因过表达后,虎奶菇菌丝对逆境有一定的抵抗能力。初步判断PtMn-SOD基因在抗氧化胁迫中起作用。