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急性肺损伤(Acutelunginjury，ALI)是由感染等多种因素引起的以中性粒细胞浸润为主的肺组织的炎症反应。以促炎因子/抗炎因子失衡为特征的过度全身炎症反应，是危重病患者发生急性肺损伤的重要机制。核因子-κB(nuclearfactor-kappaB，NF-κB)是炎症相关多种细胞因子、黏附分子表达的一个关键性转录调控因子，NF-κB的活化与急性肺损伤发病关系密切，阻断NF-κB活化有可能是治疗急性肺损伤的重要手段。NF-κB抑制蛋白(inhibitoryNF-κB，IκB)是NF-κB的特异性抑制物，研究表明，第32位和第36位丝氨酸发生突变的IκBα不会被降解，与NF-κB发生不可逆性结合，发挥超抑制属性。本研究克隆了中国人IκBα基因，诱变、构建NF-κB的超抑制物IκBαM重组腺病毒表达载体，观察其对ALI中NF-κB抑制作用，为将来临床应用IκBα转基因治疗急性肺损伤提供实验依据。
研究方法：
1.应用脂多糖(LPS)诱导制备小鼠急性肺损伤模型，凝胶滞留电泳法(EMSA法)检测NF-κB在脂多糖诱发的急性肺损伤中的动态表达。
2.应用RT-PCR从外周血单核细胞克隆中国人IκBα基因，并对其S32和S36位丝氨酸密码子进行定点突变，构建pShuttle/IκBαM真核表达载体。
3.在以上工作基础上，进一步构建Ad-IκBαM重组腺病毒载体。
4.在小鼠急性肺损伤模型中运用Ad-IκBαM治疗，通过ELISA、免疫组化等方法观察基因治疗对NF-κB及炎性肺损伤的抑制作用。
研究结果：
1.NF-κB在脂多糖诱发的急性肺损伤中呈动态表达。脂多糖腹腔注射后NF-KB表达在3小时时达到高峰，随后开始下降。
2.成功克隆了中国人IκBα基因，并对其S32和S36位丝氨酸密码子进行定点突变，进一步构建了Ad-IκBαM重组腺病毒表达载体。
3.腺病毒载体可以感染肺内的主要细胞(肺泡上皮细胞)，并高效表达目的基因。
4.通过Ad-IκBαM转基因可以抑制小鼠急性肺损伤炎症模型NF-κB活化及支气管肺泡灌洗液中性粒细胞比例和TNF-α、IL-6含量的增高。
结论：
1.成功克隆中国人IκBα基因，并诱变、构建Ad-IκBαM重组腺病毒表达载体。
2.在小鼠急性肺损伤模型中，Ad-IκBαM能通过有效抑制NF-κB的活化，发挥抗炎和防治急性肺损伤的作用。