目的:膀胱癌是一种常见的泌尿系恶性肿瘤,目前虽然在早期诊断、手术治疗及术后膀胱灌注治疗等方面取得了一定的进展,但是,作为一种恶性肿瘤,复发和转移仍是其治疗的难点。人们试图采用多方面的综合治疗措施以减少膀胱癌的复发和转移,其中,研发出一种有效的肿瘤疫苗是一个重要的努力方向。从肿瘤组织中纯化出gp96—肽复合物作为一种特异性肿瘤疫苗是目前一个研究热点,其进展相当迅速。不过,虽然从患者癌组织中纯化的gp96—肽复合物可作为患者特异性的治疗性疫苗,但是,由于组织来源的限制以及纯化工序的繁杂,难以进行工业化生产。目前已证实,在gp96—肽复合物中起肿瘤免疫作用的是抗原肽而不是gp96。因此,针对gp96结合的短肽中特异性抗原肽的分析和鉴定是疫苗研制过程中有待于进一步深入研究的重要问题。这些研究对寻找一种有效的肿瘤肽疫苗和人工化生产gp96—抗原肽复合物疫苗具有积极的意义。我们通过纯化膀胱癌组织中的gp96—肽复合物,并测定、分析与gp96结合的多肽的氨基酸序列,为今后制备肿瘤肽疫苗和体外组装gp96—抗原肽复合物疫苗提供理论基础。 方法:在第一部分中,利用硫酸铵沉淀法结合亲和层析和离子交换层析技术从手术中获取的10例膀胱癌组织中纯化出gp96—肽复合物,利用gp96单克隆抗体和western-blot技术对其进行鉴定并应用BCA法对其浓度进行测定。 在第二部分中,首先利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪测定与