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第一章COX-2基因shRNA干扰载体的构建及抗肝纤维化作用目的构建COX-2shRNA真核表达载体，并观察其抗肝纤维化作用。方法1.分别从TRC shRNA、origene shRNA数据库中选取1条大鼠COX2基因及2条人COX2基因序列，分别构建3个COX-2ShRNA真核表达载体，进行酶切鉴定和测序；2.脂质体介导重组质粒转染HSC-T6细胞株,荧光显微镜观察转染效率,RT-PCR检测COX-2mRNA表达, Western-Blot检测COX-2蛋白质表达；3.SD大鼠尾静脉注射腺病毒介导的重组质粒体内转染；12周末,处死大鼠；RT-PCR检测肝组织COX-2mRNA表达,免疫组织化学检测肝组织COX-2蛋白质表达, HE、MASSON染色分析纤维病变程度,图像分析仪测量肝组织纤维病变面积。结果1.酶切、测序、比对显示，COX2-shRNA-1,2,3序列成功插入目的载体，且序列完全正确；2.荧光显微镜观察显示COX-2shRNA1、COX-2shRNA2、COX-2shRNA3转染效率均在70%以上；3.RT-PCR和Western-Blot检测证实,转染后COX-2shRNA1,2,3均可抑制HSC-T6细胞株COX-2基因的表达,但抑制程度不一,其中COX-2shRNA-1组抑制作用最明显；4. COX-2shRNA-1SD大鼠体内转染, RT-PCR和免疫组织化学检测证实,COX-2shRNA1可抑制COX-2基因表达及纤维化组织增生。结论1.成功构建COX-2基因shRNA干扰载体；2. COX-2shRNA1，2，3具有抑制HSC-T6细胞COX-2表达作用，其中COX-2shRNA-1抑制作用最为明显；3. COX-2shRNA1具有抑制SD大鼠肝组织COX-2表达的作用；4. COX-2shRNA1具有抑制SD大鼠肝纤维化作用。第二章RNAi沉默COX-2对HSC基因表达谱的影响目的研究COX-2shRNA1沉默肝星状细胞COX-2后，HSC基因表达谱的变化。方法1.实验分为COX-2shRNA1组、HK组（空载体组）；2.Trizol法提取HSC中的总RNA。纯化mRNA,两组mRNA分别逆转录合成荧光标记的cDNA混合物探针；3.荧光标记的cDNA混合物探针，与27K Rat Genome Array杂交，经严格洗片后，用GenePix40OOB扫描仪扫描芯片荧光信号图像，计算机软件数据处理，将所得的数据进行比较，得到二者间基因表达的差异信息。结果1.按Ratio值≥1.5和≤0.667标准,沉默COX-248小时、72小时后，HSC分别有45个和93个基因出现差异性表达；2.按Ratio值≥2.0和≤0.5标准,沉默COX-248小时、72小时后，HSC分别有12个和23个基因出现差异性表达；3.沉默COX-2后, HSC-T6差异表达基因主要与生物学过程（48小时、72小时分别为54.32%,44.29%）、分子功能（48小时、72小时分别为32.10%，37.14%）有关。结论1. COX-2shRNA1沉默COX-2后HSC基因表达谱发生变化；2. COX-2shRNA1沉默COX-2后差异表达基因主要与生物学过程、分子功能有关。目的研究COX-2shRNA1沉默肝星状细胞COX-2后，肝星状细胞脂肪代谢的变化,验证基因芯片筛选的与脂代谢密切相关的差异表达基因。第三章RNAi沉默COX-2对HSC细胞动力学及相关基因表达的影响目的研究COX-2shRNA1沉默肝星状细胞COX-2后，肝星状细胞增殖、凋亡及细胞周期的变化,验证基因芯片筛选的与细胞动力学密切相关的差异表达基因。方法1.MTT法检测细胞体外增殖活力；2.流式细胞术检测HSC-T6凋亡及细胞周期；3.RT-PCR法和Western blot法验证细胞动力学密切相关的差异表达基因。结果1.与空白对照组（NC）和空载体（HK）组相比，转染pYr-1.1-hU6-EGFP-COX2-shRNA1质粒，48h细胞凋亡率明显增加(P <0.01)；2.72h后HSC-T6细胞的增殖出现明显的抑制作用(P<0.05)；3. COX-2shRNA1组G1%相较NC组和HK组的G1%增高；；4.RT-PCR验证显示Cdc27、Sh3kbp1表达增加, Plcd4表达减弱,其余统学处理没有显著意义。结论1.COX-2shRNA1能够抑制HSC-T6细胞体外增殖；2.COX-2shRNA1能够促进HSC-T6凋亡；3.COX2ShRNA1可能在G0/G1期阻滞细胞周期；4. RT-PCR验证显示Cdc27、Sh3kbp1表达增加, Plcd4表达减弱。方法1.高效液相色谱法（HPLC）检测24小时、48小时、72小时各组细胞内甘油三酯、胆固醇、维生素A含量；2.RT-PCR检查验证脂代谢差异表达基因。结果1.COX-2ShRNA1组细胞内甘油三酯的含量随着时间的延长逐渐增加（F=34.524,P=0.000）,各时间段的空载体组与空白对照组比较，细胞内甘油三酯含量存在显著差异（均P<0.05）；2.COX-2ShRNA1组细胞内胆固醇的含量随着时间的延长逐渐降低（F=360.808,P=0.000）,与各时间段的空载体组与空白对照组比较，细胞内胆固醇含量存在显著差异（均P<0.05）；3.COX-2ShRNA1组细胞内维生素A的含量随着时间的延长逐渐增加（F=19346.057,P=0.000）,各时间段的空载体组与空白对照组比较，细胞内维生素A含量存在显著差异（均P<0.05）；4. RT-PCR验证显示Acsl6，Apol9a表达增加。结论1.RNAi沉默COX-2，HSC-T6细胞内甘油三酯、胆固醇、维生素A含量发生变化，其中甘油三酯、维生素A增加，胆固醇降低；2.RNAi沉默COX-2，Acsl6，Apol9a表达增加。