针刺丰隆穴预防小鼠高胆固醇血症的相关基因研究

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针刺在临床降低高胆固醇血症中已具有较肯定的疗效,而我们已有的实验也证明了针刺丰隆穴可以预防小鼠的高胆固醇血症。在本实验室的前期工作中,共获得6组不同处理的小鼠肝脏样品,分别是正常组(NM)、高脂组(HC)、针刺治疗组(EA)、他汀组(ST)、针刺预防组(EP)、针刺非穴位组(EN)。对各组小鼠血液多项生化指标的分析结果表明,针刺丰隆穴可以有效预防高胆固醇小鼠血浆总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇水平的升高。本文以高胆固醇血症组与针刺预防组小鼠为模型,对其肝脏组织的基因表达进行比较研究,为理解针刺预防高胆固醇血症的机制从分子水平上提供了实验证据。在本实验中,我们选取高脂组、针刺预防组2组小鼠肝脏组织,应用SMART技术逆转录并扩增以获取2组小鼠肝脏细胞的全长总cDNA,运用抑制消减杂交(Suppression Subtractive Hybridization,SSH)技术获得正反2个方向的差异表达基因谱。为了消除SSH过程中所产生的假阳性克隆,首先采用一种新的消除背景的方法(Negative Subtraction Chin,NSC)方法去除了SSH PCR所产生的部分假阳性产物。在SSH-NSC富集差异基因的基础上,我们采用了斑点杂交的方法对2个文库进行了差异基因的进一步筛选,共获得22个差异片段,克隆并测序。经过序列测定和分析,共得到11个在针刺预防组中上调表达基因和5个下调表达基因。除了2个基因功能未知以外,其他可分类的基因分别与胆固醇代谢,脂代谢,糖代谢,免疫调控等有关。本论文首次采用SSH结合NSC方法研究针刺小鼠肝脏组织中基因表达变化,并在实验过程中优化了SSH和NSC的实验方案。本实验中得到的结果对于从基因表达水平上阐明针刺预防高胆固醇血症的机理有着积极意义。
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