青霉素酶是B-内酰胺酶的一种,由于其具有水解青霉素类抗生素的B-内酰胺环的特点而得到广泛应用。但是国内该酶的产酶菌株Bacillus cereus CMCC(B) 63301存在着产酶能力较低、培养基价格昂贵和生产过程中酶活力不稳定等缺点。本论文以遗传背景较清楚的Bacillus cereusATCC10987为出发菌株,通过分子生物学手段重点研究了青霉素酶基因(penp)的克隆及分别在大肠杆菌与枯草芽孢杆菌中的高效表达,并对重组菌的发酵条件进行了优化,同时对经过纯化的青霉素酶的固定化进行研究。主要研究内容和结果如下：1.青霉素酶基因的克隆及在大肠杆菌中表达以Bacillus cereus 10987总DNA为模板,通过PCR技术获得了青霉素酶成熟肽基因,构建克隆载体pUC-penp;构建表达载体pET28-penp,将其电转化到E.coli BL21(DE3)中,IPTG诱导后酶活力为227.8U/mL；通过单因素试验对重组菌诱导条件的优化,酶活力可达到480U／mL。2.青霉素酶的固定化及分解牛乳中残留青霉素的研究利用Ni2+亲合层析柱纯化了重组菌表达的目的蛋白,纯化后的目的蛋白纯度超过90%。确定了高碘酸钠氧化法制备载体的条件和固定化青霉素酶的条件,并利用该固定化酶将牛奶(含0.5U青霉素G/m1)中的青霉素分解到浓度小于4μg/L。另外,还对该固定化酶的操作稳定性和储藏稳定性进行了研究。3.青霉素酶基因在枯草芽孢杆菌中的高效表达将青霉素酶基因克隆到pWB980中,即构建了分泌型表达载体pWB-penp,将其化学转化到Bacillus subtilis DB104中；重组菌在LB培养基中生长24小时,酶活力达到339U／mL。结合单因素实验和正交实验优化得到了重组菌产酶的最适培养基和最适发酵条件,优化后酶活力达到2564.5U/mL,比优化前提高了6.56倍。