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目的:建立SD胎鼠颌突未分化外胚间充质细胞的体外培养细胞模型,在此基础上探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)诱导胎鼠颌突外胚间充质细胞向成骨细胞(OB)分化的作用。
方法:采用消化贴壁法培养SD胎鼠外胚间充质细胞,建立外胚间充质细胞的体外培养细胞模型。将生长状态良好的第三代颌突间充质细胞培养于含有20 ng/mlIGF-1、50 ml/L胎牛血清(FBS)的DMEM/F12培养基中,连续培养10d。用相差倒置显微镜观察细胞的生长和形态变化,HE染色,观察细胞形态变化。抗I型胶原单抗免疫组化染色鉴定细胞性质,碱性磷酸酶染色及活性检测。
结果:原代培养的间充质细胞呈纤维样细胞生长,免疫组化染色,抗VIM为阳性,抗CK为阴性。经IGF-1培养的外胚间充质细胞,10d后在倒置显微镜下可见细胞形态发生明显变化,呈多边形,细胞紧密排列,伸出多个突起,似成骨细胞。细胞爬片HE染色,可见细胞呈不规则形态,边缘伸出多个突起。抗Ⅰ型胶原单抗(Collage-Ⅰ)免疫组化染色阳性,碱性磷酸酶(ALP)染色阳性,碱性磷酸酶(ALP)活性增高。
结论:颌突外胚间充质细胞经胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的诱导培养,细胞形态出现类成骨样改变,同时细胞分泌碱性磷酸酶和Ⅰ型胶原,出现类似成骨细胞的功能性改变。