大蒜素通过钙敏感受体在心肌细胞损伤的保护作用及机制研究

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目的:探究大蒜素是否通过钙敏感受体发挥心肌损伤的保护作用并分析其机制,为防治心肌细胞损伤提供理论基础。方法:(1)利用心肌细胞H9c2进行实验,分别使用等量的培养液、10μmol/L异丙肾上腺素、10μmol/L普萘洛尔+10μmol/L异丙肾上腺素、10μg/ml大蒜素+10μmol/L异丙肾上腺素、25μg/ml大蒜素+10μmol/L异丙肾上腺素、50μg/ml大蒜素+10μmol/L异丙肾上腺素培养心肌细胞,分别作为空白对照组、异丙肾上腺素组、大蒜素低剂量组、大蒜素中剂量组、大蒜素高剂量组以及普萘洛尔组。(2)采用鬼笔环肽染色及BCA法检测正常、损伤心肌细胞及大蒜素作用后心肌细胞的体积和炎性蛋白质含量;(3)采用JC-1染色法检测大蒜素对心肌损伤细胞线粒体跨膜电位的作用;(4)采用Western blot检测大蒜素对心肌损伤细胞凋亡相关蛋白(Bcl-2、Caspase-3)水平的影响;(5)采用免疫荧光染色及Fluo-3/AM染色检测大蒜素对心肌损伤细胞CaSR表达及细胞内Ca2+浓度变化。结果:(1)异丙肾上腺素组细胞体积和炎性蛋白质量均明显升高,差异存在统计学意义(P<0.05);经大蒜素处理48后,可明显抑制细胞体积的增加和炎性蛋白的增加;且大蒜素随浓度的升高,对损伤细胞体积和炎性蛋白质的抑制强度也不断增强,差异存在统计学意义(P<0.05);(2)异丙肾上腺素组的线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)明显下降,差异存在统计学意义(P<0.05);经大蒜素处理的心肌细胞MMP明显上升,差异存在统计学意义(P<0.05);且大蒜素随浓度的升高,MMP也逐渐上升,差异存在统计学意义(P<0.05);(3)异丙肾上腺组Caspase-3蛋白表达量明显升高,而Bcl-2蛋白表达量明显下降,差异存在统计学意义(P<0.05);经不同浓度的大蒜素处理后,随大蒜素浓度的增长,Caspase-3蛋白表达量逐渐下调,Bcl-2蛋白表达量逐渐上调,差异存在统计学意义(P<0.05);(4)异丙肾上腺组的CaSR表达和胞内Ca2+浓度显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。经不同浓度的大蒜素处理后,随大蒜素浓度的增长,CaSR表达和胞内Ca2+浓度逐渐下调,各方面比较差异均显示有统计学意义(P<0.05)。结论:大蒜素通过刺激心肌细胞(H9c2)Bcl-2表达并抑制Caspase-3及CaSR表达,减轻Ca2+超载,进而抑制心肌细胞凋亡,具有保护心肌细胞损伤的作用。
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