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RYBP与细胞凋亡关系密切，已有的研究发现RYBP高表达可以诱导实体瘤细胞系的凋亡，沉默HL60细胞系的RYBP则降低HL60细胞系的凋亡，但关于RYBP对正常细胞增值和凋亡的影响则研究偏少。本实验的研究目的就是在间充质干细胞中高表达RYBP后研究RYBP对增值和凋亡的影响，也进一步探讨RYBP在正常细胞中的作用。这也指导我们在未来是否可以将RYBP作为部分肿瘤的特异性治疗靶点提供依据。研究方法1.高表达RYBP间充质干细胞的构建1）利用携带RYBP基因的穿梭质粒通过LR反应构建慢病毒表达载体。2）将构建好的慢病毒表达载体与第三代慢病毒包装系统SL3、SL4、SL5通过Lipofectamine2000及Opti-MEM转移至293FT细胞中包装病毒并转染间充质干细胞，通过GFP荧光观察转染效率。3）嘌林霉素筛选获得稳定转染RYBP的间充质干细胞。4）对稳定转染的间充质干细胞进行western和real-time PCR验证。2.测定凋亡和增殖结果1、成功构建携带RYBP基因的慢病毒表达载体，并通过PCR验证和测序检测正确。2、成功包装病毒，并成功转染间充质干细胞，嘌林霉素筛选后获得稳定转染RYBP的间充质干细胞。3、 Western和real-time PCR验证证实RYBP成功转染间充质干细胞。4、发现高表达RYBP对间充质干细胞的凋亡并无影响。结论1、高表达RYBP对对间充质干细胞的凋亡并无影响，这说明RYBP在某些肿瘤细胞和部分正常细胞中对凋亡的影响存在差异，这也揭示部分正常细胞具有自主执行凋亡的能力。2、这种RYBP对凋亡影响的差异性在临床是很有意义的，这也给我们在未来将RYBP作为部分肿瘤的特异性治疗靶点提供理论依据。