论文部分内容阅读
本研究分别针对zRAP55基因的生物信息学分、克隆、蛋白质表达和荧光免疫组织化学4个方面分析了zRAP55的基因和蛋白质结构以及在细胞中的定位和功能，结果如下：
通过对zRAP55cDNA进行了生物信息学分析，发现该基因位于斑马鱼第23个连锁群上，包括9个外显子和8个内含子，其最大开放阅读框(ORF)位于116-1264bp，编码382个氨基酸，采用Computepl/Mwtools对zRAP55蛋白进行预测分析，其理论等电点pI为10.11，为一碱性蛋白质，分子量为26.29KD。用Tmpredprogram预测到该蛋白质的124-142氨基酸区域存在一个跨膜区域；预测结果表明该跨膜蛋白的N-terminal位于细胞膜内。Prosite分析表明该蛋白质包含谷氨酸富集区，而其他同源蛋白质序列都没有发现谷氨酸富集区。在NCBI、EMBL和DDBJ数据库中zRAP55的cDNA和预测蛋白质序列的Blast分析结果显示：zRAP55与爪蟾(NP-001025676)、小鼠(AAH40823)、人(NP_653304)、褐家鼠(EDL88837)等蛋白质序列一致性分别为59.7％、57.3％、57.2％和56.7％，上述蛋白均包括一个Lsm14保守域。
采用RT-PCR分析了zRAP55mRNA在各个组织中的表达情况，RT-PCR的扩增结果表明zRAP55在卵巢中表达量最高，肝脏和肾脏表达量极微弱，而脑、精巢和心脏三个组织均未检测到表达。
荧光免疫组织化学结果表明，在第I时相卵母细胞和II时相卵母细胞中，zRAP55的阳性信号强烈，均匀地分布于整个胞质，随着卵母细胞的发育，在第III时相卵母细胞和IV时相卵母细胞中检测不到信号，而整体卵巢中的表达情况则进一步证实了这一结果。这种表达模式表明zRAP55是一个在斑马鱼卵巢中表达尤其在早期卵母细胞(I和II)中特异性表达的基因，而且zRAP55含有一个Lsmdomain，因此本研究推测在斑马鱼卵巢组织中，zRAP55可能具有调控第I和第II时相卵母细胞蛋白质翻译的作用。