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脂质运载蛋白家族是一大类细胞外小蛋白,分布在质膜的周围并广泛存在于细菌、原生生物、节肢动物、脊索动物和植物中。拟南芥中的脂质蛋白只有一种称为温度诱导的脂质运载蛋白(TIL1),定位在细胞质膜,在拟南芥的根、茎、叶、花和角果中均有表达,对拟南芥种子萌发、营养生长、开花时间、叶片的衰老以及种子的产量均无明显影响。已有研究结果表明,TIL1基因主要参与拟南芥对逆境胁迫的调控,包括对温度、光照、高盐和氧化物等胁迫的调控。本研究观察了T-DNA插入TIL1编码基因的突变体Salk 136775c的表型,发现角果结实率下降,突变体有明显育性降低表型。综合运用多种现代生物技术,对TIL1参与雌配子体发育的机理进一步分析探讨,主要结果如下:1.角果结实率观察发现,till-1突变体结实率下降约20%育性降低明显,未发育为种子的胚珠呈白色的小点,而突变体till-2和till-3也均有育性降低表型,由此推测,TIL1基因参与种子发育过程,till-1突变体在合子发育早期或配子体发育过程中有缺陷。2. 半定量RT-PCR和实时荧光定量Q-PCR分析表明,T-DNA插入使得TIL1基因敲除,导致其功能缺失,引起till-1突变体育性降低表型。3.分别以去除雄蕊的till-1突变体的雌蕊为母本、野生型拟南芥的花粉为父本,纯合的ms-1雌蕊为母本、till-1突变体的花粉为父本,分别进行杂交试验。结果表明,till-1突变体的胚珠败育发生在配子体发育时期,而不是合子发育早期。4. Alexander染色和花粉离体培养结果表明,till-1突变体雄配子体发育正常,突变体育性缺陷不是来源于雄配子体。5.胚珠透明实验表明till-1突变体胚珠功能大孢子能正常的形成,并能正常进行三次连续的有丝分裂过程,但大孢子在进一步的发育过程中发生败育,造成成熟雌配子体发育缺陷,影响突变体育性。6.用野生型拟南芥TIL1基因与绿色荧光蛋白基因GFP构建融合表达载体转化till-1突变体,可以明显恢复育性降低表型,并发现TIL1基因在成熟雌配子胚囊中富集表达,在幼苗茎的维管组织和根中也有表达。7.在突变体til1-1中At2g33830和At2g27420分别是上调幅度和下调幅度最大的两个基因,但与之对应的Salk098437c和Salk085797c两个突变体并无育性降低的表型,证明At2g33830和At2g27420基因与TIL1基因突变引起的育性降低表型无直接关系。上述结果表明,TIL1基因突变,拟南芥出现育性降低表型,TIL1基因参与胚珠的发育,种子的形成过程。til1-1突变体中雄配子配子体发育正常并具有正常的育性,雌配子体功能大孢子能正常形成,并能进行三次连续的有丝分裂,但形成的成熟雌配子体发生缺陷,从而造成til1-1突变体育性降低表型。