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铅对人和动物健康的潜在危害,已日益引起人们的关注。铅是环境污染物中毒性很大并且以神经毒性为主的一种重金属元素,其可通过消化道和呼吸道进入人和动物体内,对神经、造血、消化、心血管等系统和肾脏造成损害。环境铅污染和食品、饲料铅污染是造成人和动物铅损伤的主要途径,因此,监测环境,食品、饲料原料和食品、饲料包装材料及食品、饲料中铅的含量,是控制人和动物铅摄入量,预防和减少铅对人和动物危害的重要措施。重金属离子的免疫学检测方法是一种新型、高效、快速的检测方法。与传统检测方法相比该方法具有检测速度快、费用低廉、简单易携、灵敏度高和选择性的特点。且可以用于重金属离子的快速检测和常规检测,在临床医学、动物检疫、食品饲料科学、药物残留等领域都有着很广泛的应用前景。本研究采用重金属铅离子与双功能螯合剂ρ-SCN-CHX-A"-DTPA进行螯合反应,制得Pb2+-SCN-CHX-A"-DTPA螯合物,再将Pb2+-SCN-CHX-A"-DTPA螯合物分别与载体蛋白KLH、BSA偶联,制备免疫抗原和针对Pb2+单克隆抗体的检测抗原。再使用双功能螯合剂p-SCN-CHX-A"-DTPA与载体蛋白BSA偶联,制备检测螯合剂的检测抗原。选取6～8周龄BALB/c雌性小鼠4只,腹腔注射合成的免疫抗原Pb2+-SCN-CHX-A"-DTPA-KLH,100μg/只,诱导小鼠机体产生对免疫抗原的免疫应答,检测其所分泌的抗体。取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(Sp2/0)进行融合、筛选及克隆,获得分泌抗Pb2+单抗的杂交瘤细胞株,并对细胞株所分泌的抗Pb2+单抗的亚类、细胞株诱生的腹水单抗的浓度及单抗亲和常数进行测定。在对单抗的效价、亲和力等进行分析的基础上,选择单抗2A3用于建立间接竞争ELISA检测方法,确定反应系统最佳工作条件,并建立标准检测曲线。结果：(1)成功制备了的免疫抗原pb2+-SCN-CHX-A"-DTPA-KLH和检测抗原pb2+-SCN-CHX-A"-DTPA-BSA以及针对螯合剂的检测抗原SCN-CHX-A"-DTPA-B SA。(2)检测抗原作1：400稀释(即检测抗原浓度为2.5μg/mL)时反应效果最佳,免疫小鼠血清效价均达1：16000以上。结果表明合成的免疫抗原Pb2+-SCN-CHX-A"-DTPA-KLH成功诱导小鼠机体产生了对免疫抗原的免疫应答,并分泌针对免疫抗原的特异性抗体。(3)免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(Sp2/0)进行融合、筛选及克隆,共得四株抗Pb2+杂交瘤细胞株,分别命名为IH4、1H7、2H1、2A3。四株抗Pb2+杂交瘤细胞所分泌的抗体均为IgM亚类。四株杂交瘤细胞所诱生的小鼠腹水抗体浓度分别为3.85mg/mL,4.21mg/mL,3.98mg/mL,4.08mg/mL,单抗亲和常数2A3>1H7>2H1>1H4,且均在108mol/L以上,单抗具有较高的亲和力。由于2A3单抗亲和常数最大,因此抗Pb2+的杂交瘤细胞株2A3最佳。(4)建立的间接竞争ELISA最佳工作条件为：螯合剂DTPA的最佳工作浓度为4 mM。抗原Pb2+-SCN-CHX-A"-DTPA-BSA (1mg/mL)最佳工作浓度为0.25mg/mL;亢铅单抗最佳工作浓度为1.02μg/mL;最佳封闭条件为10%兔血清37℃封闭1.5h；二抗最佳工作条件为5000倍稀释(0.16μg/mL),37℃作用1h；底物最佳作用时间为15min。在间接竞争ELISA最佳工作条件下,建立了铅离子标准检测曲线,其回归方程为Y=0.4695X+0.0391,相关系数R2=0.9878,铅离子最低检出浓度为2.072ng/mL。