活性氧自由基是有氧呼吸动物生理代谢过程后的产物，其化学活性极强，可与几乎任何物质发生强烈反应。在正常的生理过程中，自由基被适当抑制，然而若病理状态下调控紊乱会严重危害机体，导致许多重大疾病。面生物体在长期进化过程中，也形成了高度的防御和保护机制。两栖类尤其是蛙类生存环境恶劣，皮肤脆弱且裸露，易受紫外辐射，且皮肤兼有呼吸功能，容易受到氧化损伤。两栖类独特的生存环境和漫长的进化过程，使得其皮肤被赋予独特的抗氧化机制，能有效防止氧化损伤对皮肤造成的伤害。　　本文选取生活在长日照，高温高湿地带的脆皮大头蛙（Limnonectesfragilis）为研究材料，用以研究其皮肤是否存在独特的抗氧化体系，并试图探究其抗氧化机理。通过超滤离心和反相高效液相层析，对脆皮大头蛙皮肤分泌物进行分离纯化，鉴定出两种具有ABTS·+正离子自由基清除活性多肽，并通过Edman降解法测序分别为:VKRRGQDCIHGFCSD(15个氨基酸残基)和GQFNDKRWIPFG(12个氨基酸残基)，属于全新家族的抗氧化肽，被命名为Frigilin-A1和Frigilin-B2。　　为进一步对其基因序列进行分析以及发现更多抗氧化肽家族，本研究构建了脆皮大头蛙皮肤eDNA文库，通过抗氧化肽家族基因的保守序列设计引物，克隆得到47种抗氧化肽cDNA序列，编码21种成熟肽，隶属11个抗氧化肽家族，其中14条属于新型抗氧化肽。　　我们选取了结构完全特异的Frigilin-A1、Frigilin-B2，以及据核酸序列推测出的，与已知序列相似度最低的Odorranain-Q-Lf(APIRMWYMYRKLTDMEPKPVA)进行了化学合成，并进行了一系列结构和功能分析。结果发现三种抗氧化肽具有非常好的ABTS·+自由基正离子清除活性、DPPH自由基清除活性、还原力(Fe3+)活性和脂质过氧化抑制活性，且几乎不存在溶血和细胞毒性。对三条肽的二级结构、三级结构研究分析，结果表明三条抗氧化小肽具有规则的二级结构，与暴露的还原性位点，揭示了Frigilin-A1、Frigilin-B2与Odorranain-Q-Lf不是通过酶作用方式进行自由基的清除。最后，我们对抗氧化肽前体信号肽（Signalpeptides）、间隔肽(Spacepeptides)、成熟肽(Maturepeptides)核酸序列进行初步遗传进化分析，发现抗氧化肽不同区域存在不同的进化趋势，成熟肽区受到达尔文正选择压力和具有加速进化的趋势。