【摘 要】
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研究目的探讨分离、提纯和扩增孕中期羊水来源间充质干细胞(AF-MSCs)的方法,以及体外诱导AF-MSCs向软骨细胞分化的可能性。研究方法机械手段挑取孕中期人羊水细胞培养体系中
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研究目的探讨分离、提纯和扩增孕中期羊水来源间充质干细胞(AF-MSCs)的方法,以及体外诱导AF-MSCs向软骨细胞分化的可能性。研究方法机械手段挑取孕中期人羊水细胞培养体系中的MSCs集落,培养扩增后,通过流式细胞术对表面抗原表达情况进行鉴定,并通过RT-PCR检测多能性基因Oct4及Nanog的表达情况。取第3代AF-MSCs,经TGF-β1、IGF-1、地塞米松等生长因子向软骨细胞方向诱导分化。倒置相差显微镜观察诱导后细胞形态的变化。诱导3周后,免疫荧光染色及RT-PCR分别检测软骨特异性基质CollengonⅡ、Aggrecan、Chondromudulin-1、S100的蛋白及其基因的表达情况。研究结果机械手段分离出的AF-MSCs为CD105、CD166阳性,CD29若阳性,CD34、CD45阴性,符合MSCs特点。AF-MSCs表达多能性基因Oct4,但不表达Nanog。诱导2周后,细胞开始呈多角形样改变;诱导后3周时,大部分细胞由长梭形转变为多角形。免疫荧光及RT-PCR检测显示诱导后的AF-MSCs软骨特异性基质CollengonⅡ、Aggrecan、Chondromudulin-1和S100的蛋白和基因呈阳性表达,而未经诱导培养的AF-MSCs呈阴性表达。研究结论机械分离法可有效获得孕中期羊水来源间充质干细胞,经TGF-β1,IGF-1,地塞米松联合诱导3周后,AF-MSCs可以分化为软骨细胞样细胞。
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