蝇蛆组织匀浆液及其酶解物中抑菌组分的研究

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本研究体外观察了蝇蛆组织匀浆液及其酶解液组分对病原性大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和枯草杆菌增殖的影响;结合动物实验,探讨了匀浆液及其酶解液对动物抗大肠杆菌、沙门氏菌感染的作用;并利用SephadexG-15及RP-HPLC技术对有效抑菌组分进行了初步的分离与鉴定,为天然抗菌物质的开发提供实验依据。1蝇蛆组织匀浆液对细菌增殖的影响以及对小鼠的抗感染保护研究以人工培养的新鲜蝇蛆为原料,采用磷酸盐缓冲液匀浆,观察匀浆液及其热灭活液,对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌增殖的影响。结果表明,蝇蛆组织匀浆液显著抑制大肠杆菌和沙门氏菌的增殖,而显著促进金黄色葡萄球菌和枯草杆菌的增殖。蝇蛆组织匀浆液加热灭活后抑菌生物活性丧失。根据体外实验结果,探讨蝇蛆组织匀浆液在动物体内抗大肠杆菌和沙门氏菌感染保护作用,通过体内攻菌实验确定LD50。选用28日龄昆明系清洁级雄性小鼠60只,随机分为3个处理组(n=20):正常对照组:基础日粮+生理盐水;蝇蛆组织匀浆液热灭活液组:基础日粮+蝇蛆组织匀浆液热灭活液;组织匀浆液组:基础日粮+组织匀浆液。各处理组灌喂液体积相等,0.3mL/只,连续灌喂7天后,第8天将E.coli(菌浓为1.80×1011 CFU/L)/沙门氏菌(菌浓为2.70×1011CFU/L)分别灌喂组织匀浆液热灭活液组和组织匀浆液组,0.3mL/只。观察小鼠发病及死亡情况直至灌菌后56 h,处死各组小鼠,取盲肠食糜,用平板细菌计数法测定食糜内特定细菌的含量。结果显示小鼠灌喂蝇蛆组织匀浆液后,能显著提高灌喂1.8×1011 CFU/L E.coli后小鼠的健康水平(比对照组提高了83.25%)和2.7×1011 CFU/L的沙门氏菌后小鼠的健康水平(比对照组提高了42.85%),并且盲肠食糜内特定细菌数量,实验组也均显著低于对照组(p<0.05)。本实验结果表明蝇蛆组织匀浆液在体外能抑制大肠杆菌和沙门氏菌的生长,在体内能抵御外源性大肠杆菌和沙门氏菌的侵袭感染,预防胃肠道疾病的发生。2蝇蛆组织匀浆液酶解液对细菌增殖的影响以及对小鼠的抗感染保护研究蝇蛆组织匀浆液分别经胰蛋白酶、胃蛋白酶酶解后,观察其分别对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌四种细菌增殖的影响。结果表明,胰酶酶解组分对大肠杆菌和沙门氏菌的增殖有显著的抑制作用,对金黄色葡萄球菌和枯草杆菌有显著的促进作用;胃蛋白酶酶解组分对四种细菌均起到促进生长的作用。同时胰蛋白酶酶解液加热灭活后其生物活性没有发生显著性变化。根据体外实验结果,探讨蝇蛆组织匀浆液胰蛋白酶酶解液在动物体内抗大肠杆菌和沙门氏菌感染保护作用,通过体内攻菌实验确定LD50。选用28日龄昆明系清洁级雄性小鼠50只,随机分为3个处理组(正常对照组10只,其余两组各20只):正常对照组:基础日粮+生理盐水;试验对照组:基础日粮+生理盐水;胰酶酶解液组:基础日粮+胰蛋白酶酶解液。各处理组灌喂液体积相等,0.3mL/只,连续灌喂7天后,第8天将E.coli(菌浓为3.38×1011 CFU/L)/沙门氏菌(菌浓为2.87×1011CFU/L)分别灌喂试验对照组和酶解液组,0.3mL/只,观察小鼠发病及死亡情况直至灌菌后56 h,处死各组小鼠,取盲肠食糜,用平板细菌计数法测定食糜内特定细菌的含量。结果显示小鼠灌喂胰酶酶解液后,能显著提高灌喂3.38×1011 CFU/L E.coli、2.87×1011 CFU/L的沙门氏菌后小鼠的健康水平(实验组分别比对照组提高了25.02%和14.27%),并且盲肠食糜内特定细菌的数量实验组也均显著低于对照组(p<0.05)。本实验结果表明胰酶酶解液在体外能抑制大肠杆菌和沙门氏菌的生长,在体内能抵御外源性大肠杆菌和沙门氏菌的侵袭感染,预防胃肠道疾病的发生。3蝇蛆组织匀浆液胰蛋白酶酶解液中抑菌组分的分离蝇蛆组织匀浆液胰蛋白酶酶解液经SephadexG-15层析柱后,收集到3个主要吸收峰,观察不同组分对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌四种细菌的增殖作用。结果表明,3号峰组分对大肠杆菌和沙门氏菌的增殖有显著的抑制作用,对金黄色葡萄球菌和枯草杆菌有显著的促进生长作用,1号和2号峰组分对四种细菌起到促进生长的作用。RP-HPLC检测3号峰样品内主要有4个肽的吸收峰。本实验结果表明蝇蛆组织匀浆液胰蛋白酶酶解液中起抑菌作用的主要是一些肽类物质。
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