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黄芩Scutellaria baicalensis Georgi是我国传统常用大宗中药材。黄芩根中富含黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素等多种黄酮类化合物,用途广泛,药用价值高。 本研究以山西省的道地药材黄芩为研究对象,在优化主要成分提取条件及测定条件的基础上,分析、测定了山西省35个不同产地的野生黄芩根中的黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素与总黄酮的含量;初步建立了山西野生黄芩细胞培养和不定根培养生产有用成分的技术体系,考察了多种理化因子对悬浮细胞培养、不定根培养的影响以及对黄芩苷和总黄酮合成的影响;观察、比较了山西12个产地野生黄芩根、茎、叶的显微结构。研究结果为山西省野生黄芩资源的保护、开发、利用和优良野生黄芩种质的选育提供了生药学和解剖学指标,为应用植物组织培养技术生产黄芩药用成分提供了依据。 研究结果表明: ⑴山西野生黄芩根中总黄酮的适宜提取条件为:液固比80:1,60℃下65﹪乙醇超声提取20 min;根中黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的适宜分离条件为:流动相为甲醇(A)和0.4﹪磷酸水溶液(B);梯度洗脱程序为:0~50 min,38﹪A;50~55 min,38﹪~58﹪A;55~70min,58﹪A。 ⑵35个产地的山西野生黄芩根中的黄芩苷含量为3.64﹪~15.31﹪,黄芩素含量为0.23﹪~2.28﹪,汉黄芩素含量为0.05﹪~0.62﹪,总黄酮含量为8.65﹪~27.06﹪。黄芩苷、总黄酮的含量总体上与纬度呈负相关。 ⑶山西野生黄芩根的适宜消毒条件为:75﹪乙醇预处理30 s,0.2﹪的HgCl2水溶液消毒10 min。根愈伤组织诱导的适宜培养基为:MS+1.5 mg/L6-BA+0.5 mg/L2,4-D+0.5 mg/L KT。根愈伤组织的生长曲线为“S”型,并且其生长与总黄酮的积累基本同步。暗培养有利于根愈伤组织的生长与总黄酮的合成。 ⑷山西野生黄芩根细胞悬浮培养的适宜培养条件为:B5+0.2 mg/L2,4-D+0.8 mg/L6-B A+1.0 mg/L NAA+30 g/L蔗糖,初始接种量为10 g/L,培养基pH6.3。黄芩根悬浮细胞合成总黄酮的最适培养条件为:B5+0.4 mg/L2,4-D+0.5 mg/L6-BA+0.5 mg/L NAA+30 g/L蔗糖,pH4.8。 ⑸山西野生黄芩不定根生长及次生代谢产物合成的适宜培养条件为:1/2 MS+0.5mg/L DSC+50 g/L蔗糖,初始接种量为4 g/L,pH5.0。 ⑹12个产地的山西野生黄芩的根在木栓层、石细胞的数量及分布上存在差异;茎分为近圆形和四棱形两种,茎的棱角凸起度以及皮层、韧皮部及木质部厚度均存在差异;黄芩叶在叶片厚度、栅栏组织及海绵组织的厚度上存在差异。