鸡Ⅱ型胶原建立豚鼠自身免疫性内耳病的实验研究

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背景与目的 许多感音神经性聋与免疫因素有关,但在临床工作中常不被重视。部分突聋、梅尼埃病、耳硬化症、慢性中耳炎、颞骨创伤,以及一些伴发听力丧失的全身免疫性疾病都存在内耳免疫损伤因素。目前,免疫相关性内耳疾病的名称有多种,自身免疫性内耳病(autoimmune inner ear disease,AIED)是其暂定统称。在不影响听力的前提下,不可能对内耳进行活检,故对此病的研究和认识受到限制。建立此类疾病的动物模型成为研究此类疾病的有效途径。对此类疾病的研究国内外所用抗原主要有:Ⅱ型胶原(type Ⅱ collagen,CⅡ)、内耳膜组织抗原(同种异体动物或异种动物)和异种动物血清等。建立动物模型的方式主要有:系统性免疫、单纯内耳局部免疫和系统加内耳局部免疫等。但是,内耳局部注入抗原的方法不妥,虽然激发了内耳强烈的免疫反应,但只代表部分AIED临床发病机理(手术或外伤致内耳抗原暴露于内耳免疫系统),不能包括全部。Ⅱ型胶原成分相对单一,而且已经在疑似AIED疾病患者体内发现Ⅱ型胶原抗体。国内外有学者用Ⅱ型胶原尝试建立了不同动物的AIED模型,但结果差异较大、观点不一;并且鲜有对此模型发病初期细胞间粘附因子-1(intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1)表达的研究。 为了明确Ⅱ型胶原是否在AIED发病中起关键作用,以及研究模型建立初期ICAM-1的表达情况,本实验用鸡Ⅱ型胶原建立豚鼠自身免疫性内耳病模型,用郑州大学2004年硕士研究生毕业论文鸡!!型胶原建立豚鼠自身免疫性内耳病的实验研究免疫组织化学技术观察模型建立初期ICAM一1的表达情况,并从功能、形态方面评价动物模型的内耳损伤情况。 材料与方法选用耳廓反射灵敏,体重150一200克纯白红目豚鼠65只,雌雄不限,随机分为以下三组:I组:对照组(10只,20耳),不施加任何因素,与111组相同时间点各处死5只;11组:佐剂组(15只,死亡1只,28耳),首次皮下注射完全弗氏佐剂(eomplete Freundadjuvant,eF^)o.iml,以后每周皮下注射i次o.rml不完全弗氏佐剂(ineomplete Reundadjuvant,I队),共注射6次,分别于末次注射后第3天和2周处死7只;m组:实验组(40只,死亡3只),首次皮下注射鸡11型胶原(400 pg)与cFA的乳浊液0.lml,以后每周皮下注射1次鸡11型胶原(200 pg)与IFA的乳浊液0.lml,共注射6次,末次注射后3天和2周分别处死19只、18只。各组动物均在处死前测定ABR。测试每只豚鼠两耳的ABR闭值、各波潜伏期及I一m波波间期,以70 dBSPL刺激强度所得出的各测试参量进行统计学分析。处死后I组和11组均用2只(4耳)作扫描电镜观察,111组用5只(10耳)作扫描电镜观察,剩余动物内耳作石蜡包块供免疫组织化学测ICAM一1的表达以及HE染色观察。实验数据用SPSS10.0软件处理。 结果 1.ABR测试结果各波潜伏期及I一m波波间期,在I组和n组之间差异无显著性(P>0.05),111组较I组和11组有延长(P<0.05),111组2周较3天时有延长(P<0.05)。听觉阂值:I组和11组之间差异无显著性(P>.05),111组较I组和11组有升高(P<0.05),111组2周时较3天时有升高(P<0.05)。111组3天38耳中8耳出现听力阂值升高,范围在10 dB左右,部分闭值无升高耳各波潜伏期及I一m波波间期也有延长。2周36耳中有13耳出现听力阂值升高,听损率为36.11%,范围在10 dB一30 dB之间。 2.扫描电镜观察结果I组和11组的内毛细胞和外毛细胞听毛排列整齐,无缺失;m组3天时第三排外毛细胞部分听毛缺失和倒伏,第一、二排不明显;m组2周时第三排外毛细胞听毛出现倒伏、部分听毛呈簇状缺失或完全缺失,第一和第二排外毛细胞听毛有轻微的倒伏,无缺失现象。 3.免疫组织化学结果I组和11组耳蜗组织ICAM一1表达为阴性;IIJ组螺旋神经节细胞、神经纤维、血管纹、基底膜和血管内皮细胞等部位均有ICAM一1郑州大学2004年硕士研究生毕业论文鸡”型胶原建立豚鼠自身免疫性内耳病的实验研究表达;111组2周较3天时ICAM一1表达明显下降。经统计学检验:I组和11组之间差异无显著性(P>0.05);nl组与I组和11组之间均有显著性差异(P<0.05);111组2周与3天之间有显著性差异(P<0.05)。 结论1.鸡11型胶原可以诱发豚鼠产生自身免疫性内耳病。2.自身免疫性内耳病发病机制中n型胶原起一定作用,但存在种系和个体差异。3.自身免疫性内耳病发病初期炎症因子ICAM一1起重要作用,其可能是此病的 发病机制之一。4.鸡H型胶原诱发豚鼠产生自身免疫性内耳病,可以引起豚鼠内耳形态结构和 听觉功能的损伤。5.本实验为临床研究自身免疫性内耳病提供了一些实验依据。
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