【摘 要】
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牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)引起的牛传染性鼻气管炎(IBR)使病畜产奶量、繁殖力及使役力降低,严重威胁全球养牛业经济发展。IBRV g B蛋白位于病毒囊膜,在整个疱疹病毒家族中最为保守,且在病毒的传播、扩散和融合机制以及免疫中发挥重要作用。因此,本研究通过对IBRV g B基因的生物信息学分析,避开g B基因跨膜区和信号肽切割位点,选择亲水性较强区域和抗原决定簇正分高处的基因片段。以实验室分离
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牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)引起的牛传染性鼻气管炎(IBR)使病畜产奶量、繁殖力及使役力降低,严重威胁全球养牛业经济发展。IBRV g B蛋白位于病毒囊膜,在整个疱疹病毒家族中最为保守,且在病毒的传播、扩散和融合机制以及免疫中发挥重要作用。因此,本研究通过对IBRV g B基因的生物信息学分析,避开g B基因跨膜区和信号肽切割位点,选择亲水性较强区域和抗原决定簇正分高处的基因片段。以实验室分离到的IBRV NM14株为模板,构建g B截短基因的原核表达质粒(p ET-32a-g B)和真核表达质粒(pc DNA3.1-g B),大量表达重组g B蛋白,制备单克隆抗体,同时制备亚单位疫苗免疫豚鼠。此外,基于IBRV g B亚单位疫苗建立豚鼠感染模型。实验表明,原核表达质粒(p ET-32a-g B)可大量表达具有良好免疫原性的g B包涵体蛋白。g B蛋白免疫小鼠后成功筛选出4株单克隆抗体,其不仅能与原核质粒p ET-32a-g B和真核质粒pc DNA3.1-g B表达的g B蛋白特异性结合,还能与IBRV全病毒抗原结合,具有良好的空间构像。亚单位疫苗免疫豚鼠后,经中和试验和间接ELISA的结果表明重组蛋白具有良好的免疫原性和反应原性,其产生的中和抗体水平和特异性g B抗体水平与空白对照组相比显著升高(P<0.001),且在免疫后35 d达后到峰值,其中和效价可达到1:85。此外,在IBR野毒攻击后,免疫亚单位疫苗组豚鼠无明显临床症状且其临床评分低于感染IBR野毒组豚鼠的临床评分;未免疫亚单位疫苗组豚鼠肺组织病毒含量显著高于亚单位疫苗免疫组豚鼠肺组织中病中毒含量(P<0.001)。豚鼠肺组织病理组织切片分析的结果与肺组织中病毒载量检测结果相似,感染组豚鼠模型肺组织出现典型间质性肺炎病变,而野毒攻击后免疫组豚鼠肺脏组织只出现较轻微的病变。综合分析,g B亚单位疫苗可以抑制病毒大量增殖且对豚鼠具有保护效果。本研究为进一步研究IBRV亚单位疫苗、IBR的临床诊断试剂和IBRV g B蛋白功能奠定了基础。
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