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据调查显示,药源性聋患者逐年增加,约占听力损失人数的20%,已成为新生儿先天性聋和成年人后天性聋的主要原因。药源性聋患者除耳聋外,常伴有耳鸣、眩晕、共济失调等症状,极大地影响患者的身心健康和生活质量。临床上常见引起药源性聋的药物以氨基糖类抗生素和铂类化疗药为主,均会引起耳蜗毛细胞不可逆的损伤而致聋。目前临床上防治药源性聋的药物匮乏,因此寻找具有保护或使耳蜗毛细胞再生的药物是研究者面临的一个重大挑战。中药是我国宝贵的资源,有毒性低、含大量生物活性分子等特点。此外,海洋微生物代谢物类型丰富,使其成为近年的研究热点之一。中药材和微生物代谢物在抗肿瘤、抗炎、抗病毒、听力障碍等各类疾病中均有应用,是寻找防治药源性聋活性成分的重要储藏库。因此,本研究以庆大霉素和顺铂致HEI-OC1(House Ear Institute-Organ of Corti 1)细胞及斑马鱼毛细胞损伤模型进行体内外实验,对11种中药提取物及13个单体化合物(取自中药和海洋微生物)进行筛选,快速寻找具有防治药源性聋活性成分。主要研究内容如下:经文献和中药典籍的调研,发现有11种中药在治疗耳部疾病中应用较多。将11种中药用75%的乙醇提取得到粗提物,以庆大霉素和顺铂致HEI-OC1细胞损伤模型进行体外研究。研究显示,对庆大霉素致损伤有预防作用的中药有PH、CGE、GA、PMR、香附和PQR;对顺铂致损伤有预防作用的中药是香附。以11味中药的提取物为研究对象,用庆大霉素和顺铂致斑马鱼毛细胞损伤的预防模型进行体内研究。研究结果显示,对庆大霉素致损伤有预防作用的中药有香附、CSF和ALR;对顺铂致损伤有预防作用的有AOR、PMR和PH。经细胞实验和斑马鱼实验筛选出香附具有良好预防作用,对其活性成分进一步研究。经文献调研,香附中最主要的成分为黄酮类,推测黄酮是预防庆大霉素损伤的活性成分,并通过庆大霉素致斑马鱼毛细胞损伤实验证实。比较含道地药材三个产地的香附是否有活性差异,结果显示,山东产地的活性较安徽和广东的低,安徽和广东产地无差异。对安徽产地的香附通过活性追踪指导分离的方法,并对活性馏分C10通过LC-MS/MS分析出三个已知的黄酮类化合物。对各馏分分离纯化得到10个单体化合物,分别为:豆甾醇(LJ-1)、决明蒽醌(LJ-2)、5-甲氧基-2-甲基-1,4-萘醌(LJ-3)、大黄素(LJ-4)、橙钝叶决明素(LJ-5)、丁香酸(LJ-6)、丁二酸(LJ-7)、木犀草素(LJ-8)、香附稀酸(LJ-9)、己内酰胺(LJ-10)。其中化合物LJ-3是首次从天然产物中发现。以庆大霉素和顺铂致斑马鱼毛细胞损伤的预防及治疗模型,对八个中药的单体化合物和五个海洋微生物代谢物进行防治药源性聋的筛选。预防模型结果显示:黄酮类LJ-8对庆大霉素致斑马鱼毛细胞损伤有预防作用;甾醇类LJ-1、11,萜类LJ-16、有机酸类LJ-7均对顺铂致斑马鱼毛细胞损伤有预防作用。治疗模型中,甾醇类LJ-13对庆大霉素致斑马鱼毛细胞的损伤有治疗作用;甾醇类LJ-11、12对顺铂致斑马鱼毛细胞损伤有治疗作用。在早期,科学家指出人类耳蜗毛细胞的损伤是不可再生的,使得大量研究局限于控制病因与缓解症状。近期的研究发现,虽然毛细胞不可直接再生,但位于毛细胞四周的支持细胞可以再生,而支持细胞能分化成毛细胞,这说明毛细胞的再生是可行的。现有少量治疗听力损失的药物(如:SENS-401、AM-125、Ebselen)已进入临床试验,但机制尚未完全明确。综上所述,通过对11种中药提取物及13个化合物进行防治药源性聋活性的筛选,有9种中药提取物和7单体化合物均显示有预防或治疗的活性。本研究显示2个甾醇类化合物有促进斑马鱼毛细胞增殖的能力,这为防治药源性聋的先导化合物研究提供了新思路。