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研究目的胰腺癌(Pancreatic adenocarcinoma,PAAD)是全球范围内恶性程度最高的消化道肿瘤之一,是所有恶性肿瘤中第四大死亡原因,5年生存率仅为5%。随着医疗技术发展,虽然PAAD的诊断与治疗得到了巨大的改善,但目前为止尚无治疗PAAD的特效药物。细胞周期蛋白依赖性激酶12(cyclin dependent kinase 12,CDK12)是转录相关的周期蛋白依赖性激酶之一,可使RNA聚合酶Ⅱ碳端氨基酸(carboxy terminal domain of RNA polymeraseⅡ,RNA pol II CTD)中的丝氨酸磷酸化,在多种肿瘤的发生、发展中具有重要作用。本研究检测了CDK12在胰腺癌细胞系和组织中的表达情况,分析了CDK12表达与PAAD患者临床病理特征之间的相关性及CDK12表达水平对于PAAD患者生存预后的影响,旨在为PAAD患者的辅助诊断、靶向治疗和患者预后生存的评估提供帮助。方法1生信学分析本研究通过HPA数据库分析了人体各组织、细胞中CDK12的表达水平,随后通过CCLE数据库、GENT数据库、GEPIA数据库分析了人类各肿瘤组织、细胞中CDK12 mRNA的表达情况,紧接着通过cBioPortal数据库,Oncomine数据库、UCSC Xena数据库、GEPIA数据库、CCLE数据库以及HPA数据库分析了PAAD中CDK12的基因突变频率与突变形式,CDK12 mRNA、蛋白表达情况以及41种胰腺癌细胞系中CDK12的相对表达量,之后我们通过Oncolnc数据库、HPA数据库分析了CDK12表达水平与PAAD患者生存预后之间的相关性。2实验验证我们运用RT-PCR、Western blot以及免疫组织化学染色验证了PAAD细胞、正常胰腺细胞及60例PAAD组织、与之相对应的癌旁组织中CDK12的表达情况,我们还采集了患者的临床病理资料并进行了预后随访,运用Kaplan-Meier曲线及log-rank检验描述了PAAD患者生存期并对其临床病理资料进行统计分析,通过Cox回归模型评估了CDK12在PAAD中的诊断与预后价值。结果1人体各组织、细胞中CDK12的表达量普遍较高,在胰腺中CDK12蛋白表达评分较高而CDK12 RNA表达量相对较低。2 CDK12在包括PAAD在内的多种肿瘤组织中高表达,与正常胰腺组织相比,CDK12在PAAD中的表达中位数增加了2.41倍。3 CDK12蛋白中存在P kinase结构域之外的6个突变位点,CDK12在不同的数据集中存在不同的突变频率,CDK12突变的主要表现形式为扩增,PAADCNAs与CDK12的表达水平相关。4 Oncomine、UCSC Xena、GEPIA、HPA数据库分析结果显示CDK12 mRNA、蛋白在PAAD中的表达水平均明显高于正常胰腺组织(p<0.05)。CCLE数据库分析结果显示在AsPC-1、BxPC-3、PANC-1以及MIA-PaCA2这4株PAAD细胞中CDK12 mRNA(-log2)的表达量均大于3,表达程度相对较高。5 Oncolnc数据库、HPA数据库分析结果显示,与CDK12低表达的PAAD患者相比,CDK12高表达PAAD患者的生存期明显减少(p<0.05)。6 RT-PCR、Western blot结果提示与正常胰腺细胞相比,PAAD细胞中CDK12RNA、蛋白表达显著增高(p<0.05),这与之前的预测结果相一致。7免疫组织化学染色结果表明在60例PAAD组织中CDK12的阳性表达率为73.33%(44/60),而在与其相对应的癌旁组织中为21.66%(13/60)(p<0.05)。CDK12的表达水平与PAAD患者肿瘤直径、淋巴结转移、TNM分期、分化程度以及肿瘤标记物CA19-9明显相关(p<0.05)。8 Kaplan-Meier曲线及log-rank检验结果提示与CDK12低表达的患者相比,CDK12高表达的PAAD患者生存期明显降低(p<0.05)。Cox回归模型提CDK12的表达水平与PAAD患者的预后生存明显相关,CDK12高表达为PAAD患者独立预后危险因素(p<0.05)。结论CDK12在胰腺癌细胞系及组织中高表达,CDK12表达水平与PAAD患者生存预后相关,相较于CDK12低表达的PAAD患者,CDK12高表达的患者预后更差,CDK12高表达是PAAD患者预后生存的独立危险因素,CDK12可能是判断PAAD患者生存预后的新型生物标记物,CDK12可能是PAAD患者靶向治疗的新靶点。