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随着植物抗逆分子机制研究的不断深入,已经分离和克隆出了大量的抗逆相关基因,并通过转基因技术将抗逆基因转入植物获得一些抗逆性提高的植株。转基因植物多使用组成型启动子,但是其过表达后会引起代谢负荷,阻遏植物正常生长的缺点影响了应用,现在更多的关注诱导型启动子。本实验利用前期已从新牧1号苜蓿中克隆得到的MvDREB1基因和其启动子,进行了如下研究: (1)将MvDREB1基因启动子pMvdreb1替换pCAMBIA1304载体上的CaMV35S启动子,构建出含有GUS报告基因的植物表达载体pCAMBIA1304-pMvdreb1∷GUS,同时,将pMvdreb1启动子替换之前已经构建成功的植物表达载体pCAMBIA1301-MvDREB1上的CaMV35S启动子,构建植物表达载体pCAMBIA1301-pMvdreb1∷MvDREB1。 (2)通过农杆菌介导法,将植物表达载体pCAMBIA1304-pMvdreb1∷GUS以及空载体pCAMBIA1304-35S∷GUS转入烟草,经过不同逆境胁迫转基因烟草后检测报告基因GUS的表达情况,结果表明:在低温胁迫下,pMvdreb1启动子调控的GUS表达量明显增高,失去胁迫后逐渐降低;对照35S启动子调控的GUS表达量在胁迫前后没有明显的差异。所以,pMvdreb1启动子是一个低温相关的诱导型启动子。 (3)通过农杆菌介导法将pCAMBIA1301-pMvdreb1∷MvDREB1、pCAMBIA1301-MvDREB1转入烟草。对不同逆境胁迫后转基因烟草表型分析和半定量PCR分析,证实了MvDREB1基因是一个抗寒相关基因。在低温胁迫下,转pMvdreb1∷MvDREB1烟草中MvDREB1基因的表达量明显高于转35S∷MvDREB1烟草中MvDREB1基因的表达量。pMvdreb1启动子相比较组成型35S启动子能更快,更好的诱导目的基因的表达。在干旱和盐胁迫下,pMvdreb1启动子调控下的MvDREB1基因与35S启动子调控下的MvDREB1基因在胁迫前后表达量没有明显变化,所以MvDREB1基因不是一个与抗旱及抗盐碱相关的基因。