基于量子点的易纤维化蛋白检测

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随着纳米科技的研究和发展,纳米材料已被公认为本世纪最有前景的材料。量子点作为一种新型荧光纳米材料,由于具有量子尺寸和介电限域效应,与传统有机荧光材料相比,具有更优良的荧光特性,如吸收光谱宽、荧光量子点产率高、耐光漂白、单色激发多色发射等特点,因此,在生化检测、疾病诊断、分子标记、细胞/活体成像、高通量检测等领域得到非常广泛的应用。阿尔茨海默症、朊蛋白病、糖尿病等疾病都是蛋白质淀粉样变性疾病,导致这类疾病的最主要原因之一是蛋白质分子的异常聚集和构象的错误折叠。据报道,目前有近30种疾病与淀粉样蛋白的聚集有关,如神经退行性疾病阿尔茨海默症与p-淀粉样肽的聚集有关,神经系统变性疾病朊蛋白病的相关疾病与朊蛋白的沉积有关,而帕金森症和α-突触核蛋白的的纤维化也具有密切的关系。研究表明,通过检测与淀粉样变性疾病相关的蛋白,可以实现对淀粉样变性疾病的早期诊断。朊蛋白是神经系统变性疾病朊蛋白病的病原体,朊蛋白病具有致命性、传染性以及遗传性等特点,朊蛋白病病人的病情基本上都是进行性发展,发病后5个月至1年内死亡,死亡率约为99.2%,远远高于癌症。因此,发展一种快速、简单、灵敏、便宜,又能够直接运用于实际生物样品中朊蛋白的检测方法,对阻止朊蛋白病的传播与早期诊断朊蛋白病是非常必要的。阿尔茨海默病又被称作老年痴呆症,是一种神经退行性疾病,具有进行性,严重的患者还可能出现自杀等念头,若不能及时诊断治疗控制病情,后果将是非常严重的。目前,该疾病已经影响了全球3500万人。要减少该疾病的发展,最主要是要实现阿尔茨海默病的早期检测,早期治疗。现有工作证实,β-淀粉样肽是阿尔茨海默病的标志物,可以用于该病的早期诊断。目前,用于检测p-淀粉样肽的方法很多,但是大多数检测都涉及到抗体,操作繁琐,花费昂贵,因此,急需要发展一种简单、便宜的无标记的检测方法去检测与阿尔茨海默症有关的p-淀粉样肽。本论文的主要研究工作如下:(1)以颜色互补原理为基础建立新型的色度法,可视化检测易纤维化蛋白朊蛋白。颜色互补原理是指将两种互为互补颜色的溶液按一定量混合在一起,混合溶液的颜色能够变为灰色或无色,基于这种原理,我们将橙红色的CdTe量子点(CdTe QDs,吸收为480nm)与一定量蓝绿色的孔雀石绿(MG,吸收为617nm)混合在一起,混合后,溶液呈现无色,加入朊蛋白后溶液呈现蓝绿色,从而可以实现可视化检测朊蛋白,随着朊蛋白含量的增加,溶液在617nm处的吸收增大,从而可以定量检测朊蛋白。我们用TEM证实了反应原理,发现在加入了朊蛋白的CdTe QDs-MG体系中,CdTe QDs发生了团聚,说明溶液中量子点的浓度降低,出现MG的蓝绿色。基于颜色互补原理建立的检测朊蛋白的方法具有很好的选择性,金属离子、氨基酸、蛋白质等对检测无干扰。我们成功将该方法用于胎牛血清以及人血清中朊蛋白的测定,说明该方法能运用于实际样中朊蛋白的检测。(2)以氧化石墨为碳源制备的碳量子点(Graphite oxide,CQDs)作为荧光探针,无标记法检测易纤维化蛋白Aβ1-42。以CQDs为荧光探针与Aβ1-42发生作用,通过随着Aβ1-42浓度的增加,CQDs的荧光强度呈线性降低,可以用于Ap1-42检测,同时我们优化了一些影响Aβ1-42纤维化的条件,如酸度和孵育温度等,虽然此方法检测灵敏度不高,但是为溶液中Aβ1-42含量的检测提供了新的方法。
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