【摘 要】
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目的:探索Nrf2(核因子NF-E2相关因子)在过氧化氩(H2O2)诱导的人晶状体上皮细胞(hLEC)氧化-内质网联合应激状态下的保护机制,同时求证Nrf2与ATF4(激活转录因子4)是否在联合应
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目的:探索Nrf2(核因子NF-E2相关因子)在过氧化氩(H2O2)诱导的人晶状体上皮细胞(hLEC)氧化-内质网联合应激状态下的保护机制,同时求证Nrf2与ATF4(激活转录因子4)是否在联合应激过程中发生相互作用,为延缓年龄相关性白内障发生发展寻找新的药物靶点。方法:hLEC在400μM H2O2中预培养24h建立联合应激损伤模型,通过细胞转染分别上调、下调hLEC中Nrf2和/或ATF4表达。光镜下分析细胞形态、CCK-8法评估细胞存活率、检测H2O2含量,流式细胞仪检测细胞内活性氧ROS水平。Western Blot检测内质网应激通路蛋白表达程度、RT-PCR在RNA水平同步验证;分离细胞质及细胞核蛋白,检测Nrf2、ATF4及其相关蛋白表达水平、利用免疫共沉淀(Co-IP法)检测转录水平上Nrf2和ATF4相互作用程度。分别检测经过Nrf2或ATF4上调或下调的hLEC在联合应激中细胞总抗氧化能力、谷胱甘肽GSH、超氧岐化酶SOD、过氧化氢酶及各项下游Ⅱ相抗氧化酶表达水平。结果:1.Nrf2增加hLEC在联合应激中存活,降低H2O2和ROS含量。2.H2O2培养诱导内质网应激3条途经激活,Nrf2和ATF4在PERK途径的转录过里发生相互作用。3.Nrf2和ATF4都可以增强hLEC在联合应激下的抗氧化能力,但Nrf2是hLEC抵御应激的必要条件,ATF4在过程中起重要的辅助作用。结论:Nrf2与ATF4的相互作用可在氧化-内质网联合应激条件下保护hLEC。
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