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根据GenBank上发表的犬(canis familiars)白细胞介素-2(interleukin-2，IL-2)基因序列，设计了一对引物。采用RT-PCR技术，以ConA刺激的犬外周血淋巴细胞为材料，从总RNA中扩增出犬IL-2基因。琼脂糖凝胶电泳显示扩增片段约为600bp。分离纯化扩增片段，克隆入pMD18-T载体，经酶切鉴定、PCR鉴定及DNA序列测序，结果表明扩增片段为犬白细胞介素-2基因，该基因与GenBank上发表的序列一致。基因序列、氨基酸和抗原性比较分析表明。犬的白细胞介素-2与其它动物的白细胞介素-2有着相似的生物学特性。 应用DNA重组技术，将CaIL-2基因分别克隆到原核表达载体pBV220、A39和pET28中，转化相应大肠杆菌DH5α或BL21。通过温度或IPTG诱导表达重组犬II-2蛋白。SDS-PAGE电泳显示，其分子量在20kD左右，三种表达质粒均在4~-5hr表达产物最高，但表达效率以pET28-CaIL-2表达质粒为最。超声波裂解细菌，SDS-PAGE电泳显示，pBV220-CaIL-2和A39-CaIL-2两种表达质粒的表达产物在包涵体和细胞裂解液上清中均有相当的含量，而pET28-CaIL-2的表达产物绝大部分存在于包涵体中，上清中含量极少。盐酸胍溶解包涵体，经透析复性，分别检测三种表达质粒的碎菌上清和复性蛋白的生物学活性。结果表明：三种表达质粒的重组IL-2对ConA活化的犬外周血淋巴细胞均具有相当高的体外维持增殖作用，pBV220-CaIL-2和A39-CaIL-2表达质粒的碎菌上清和包涵体复性蛋白的活性相当，而pET28-CaIL-2表达质粒则是包涵体复性蛋白的活性高，上清无活性。实验表明，所获得的重组犬IL-2具有较好的生物学活性，为下一步研究奠定了基础。 犬IL-2基因在pET28表达载体表达产量最高，但是以包涵体形式存在，必须经过复性才具有生物学活性。收集诱导表达的菌液，超声波破碎分离包涵体，尿素、NaCl和Ttiton-X100分别洗涤包涵体，分别用盐酸胍和尿素溶解包涵体，复性液稀释变性蛋白，缓冲液透析。SDS-PAGE分析电泳结果显示，尿素、NaCl和Ttiton-X100可洗去部分杂蛋白。对于IL-2包涵体，6M盐酸胍溶解力较8M尿素溶解能力强，且得率也较尿素变性的蛋白高，但生物学活性差异不大，都具有体外增殖活化的淋巴细胞的功能，为IL-2蛋白用于生产和临床打下基础。