候选肿瘤抑制基因dSSB1的筛选及初步功能探究

来源 :南开大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:CNHTC01
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单链DNA结合蛋白家族SSBs对于基因组的稳定性具有重要作用,参与了DNA复制、DNA损伤检测与修复、DNA重组和端粒维持等机制。已经发现的DNA单链结合蛋白有复制蛋白A(RPA)、hSSB1、hSSB2等。其中hSSB1是最近发现的一种DNA单链结合蛋白,DNA双链断裂(DSBs)会使hSSB1被ATM磷酸化,同时hSSB1稳定性增强。在DNA损伤的诱导下,hSSB1在细胞核中积累,从而影响DNA损伤反应中的终末点(endpoints),激活细胞周期检查点并参与DNA损伤修复。最近有报道称hSSB1可以与p53和p21分别结合,同时可以防止p53和p21通过泛素化途径降解。此外,hSSB1通过对p53和p21的正向调节作用,参与了DNA损伤修复反应中的G2/M期检查点。由于很多人类肿瘤的发生与p53和p21功能异常相关,因此对于hSSB1功能的研究具有重要的意义。dSSB1是hSSB1在果蝇中的同源蛋白,但尚无关于前者功能的相关报道。   本文介绍了通过遗传学技术和细胞学技术对dSSB1功能进行的初步研究,证明了dSSB1是候选肿瘤抑制基因。通过“p-element非精确剪切”转座重组,得到了纯合致死的dSSB1突变体果蝇(dSSB1基因敲除果蝇),并通过rescue实验证明是由于基因dSSB1的缺失导致了突变体果蝇的纯合致死。借助Frt-flp系统,在果蝇体内诱导了纯合的突变克隆(dSSB1-/dSSB1-),发现dSSB1纯合突变组织较周围组织具有生长优势,表现为突起和增生,并且有部分组织坏死。对dSSB1突变体果蝇的表型验证表明,dSSB1符合肿瘤抑制基因的基本特征。此外,通过显微注射得到了dSSB1过表达和RNAi转基因果蝇,并发现基因dSSB1与Hpo信号通路组分Yki和ft具有遗传学关系。同时,在果蝇S2细胞中表达了HA-dSSB1、Flag-dp53(果蝇p53同源物标签蛋白)和Flag-Dap(果蝇p21同源物标签蛋白),并纯化了GST-dSSB1融合蛋白,为研究dSSB1与dp53和Dap的相互作用关系及寻找dSSB1潜在结合蛋白奠定了基础。   综上,本文首次对基因dSSB1在果蝇体内的功能展开研究,鉴定其为候选肿瘤抑制基因,同时介绍了对dSSB1在DNA损伤修复与肿瘤形成中作用机制的初步研究,这对于进一步阐明dp53和Dap信号通路的分子机制具有重要作用。
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