【摘 要】
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禽流感（Avian Influenza,AI）是由正粘病毒科A型流感病毒引起的一种家禽高度接触性的呼吸道疾病,该病发病急、传播快、流行范围广,给我国养殖业造成了巨大的损失。禽流感病毒（Avian Influenza virus,AIV）根据血凝素（Hemagglutinin,HA）和神经氨酸酶（Neuraminidase,NA）的抗原特性的不同被分为许多亚型,包括18种H A亚型（H1～H18）以
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禽流感（Avian Influenza,AI）是由正粘病毒科A型流感病毒引起的一种家禽高度接触性的呼吸道疾病,该病发病急、传播快、流行范围广,给我国养殖业造成了巨大的损失。禽流感病毒（Avian Influenza virus,AIV）根据血凝素（Hemagglutinin,HA）和神经氨酸酶（Neuraminidase,NA）的抗原特性的不同被分为许多亚型,包括18种H A亚型（H1～H18）以及11种NA亚型（N1～N11）。其中H9N2 AIV在全世界各类型的家禽中流行,并且能够感染哺乳动物甚至人类,我国H9N2 AIV的流行极为复杂。为了调查山东省内H9N2 AIV的流行情况及致病性,本研究于2020年至2021年期间收集了疑似禽流感病例274份,对病鸡进行了剖检观察、病理组织学诊断及病原学检测,并进行了病毒分离纯化。对分离到的11株病毒进行了全基因组测序,并对分离毒株进行了同源性分析、遗传进化分析、关键氨基酸位点及糖基化位点分析。选取了4株H9N2AIV,通过滴鼻感染无特定病原体（SPF）小鼠,接毒3天剖杀部分小鼠并采集小鼠的各器官组织,进行病毒滴度测定及病理组织学观察。剩余小鼠持续观察14天,并称量体重。此外,本研究还收集了山东部分地区蛋鸡场的产蛋鸡血清进行了H9N2 AIV抗体检测,旨在了解我省H9N2 AIV的疫苗免疫情况,为疫苗研发及科学合理的免疫程序制定提供参考依据。研究结果显示,收集的274份样品中有73份H9N2阳性样品,阳性率为26.64%。且该病毒在冬季检出率较高。通过鸡胚尿囊腔接种分离到11株H9N2 AIV。将分离株与对照毒株进行同源性比较发现,分离株与G57基因型参考株同源性最高。通过遗传进化分析可知,所有毒株的8个基因片段组成与G57基因型一致,因此11株分离毒株均属于G57基因型。通过对分离毒株的关键氨基酸位点分析发现,11株H9N2 AIV均有突变位点,如HA蛋白的T163、N191、V198和L234,PB2蛋白的V588,PB1蛋白的V368和PA蛋白的R356,这些突变大大提升了病毒对哺乳动物的适应能力。所有分离毒株的HA裂解位点上都只有一个单一的碱性氨基酸,这属于低致病性禽流感（LPAI）病毒的分子特征,因此本次分离的毒株均为LPAIV。本研究中,所有H9N2 AIV分离株均存在31N金刚烷胺抗性突变,但并未发现神经氨酸酶抑制剂（Neuraminidase inhibito rs,NAIs）抗性的突变,这些突变表明分离毒株对M2蛋白抑制剂耐药,但对NAIs敏感。对感染小鼠病毒滴度检测结果显示,大部分H9N2 AIV可以在小鼠的鼻甲和肺脏中复制,且其中3株H9N2 AIV在鼻甲的复制效率优于在肺中的复制效率。表明大多数毒株在上呼吸道的复制能力更强。抗体检测结果显示,2020～2021年共采集了5152份产蛋鸡血清样品,H9N2 AIV平均抗体滴度为8.71 log2,离散度为23.76%,抗体合格数为4725,抗体合格率为91.71%,但是个别鸡群的抗体滴度过高,离散度过大。证明山东省的产蛋鸡群H9N2 AIV的抗体水平较高,抵御该病毒感染的能力较强,但部分鸡群存在感染风险。
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