论文部分内容阅读
内生菌是其部分或整个生活史都在健康的植物组织内,并且外观上无明显的疾病特征的一类微生物,包括细菌、真菌和放线菌。自1993年,Stierle从一种陆生植物——短叶红豆衫树皮中分离到的一株内生真菌产生紫杉醇。这个发现进一步激起人们对植物内生菌代谢产物化学和生物多样性,以及生物多样性和生态功能的相关性等科学问题的研究广泛的关注,并形成了研究热点。
研究发现,内生菌在与植物长期共进化的过程中,形成了产生某些宿主植物相同或相似化合物的能力。因此,植物内生菌是一类具有重大开发潜力的微生物资源,近年来成为微生物资源研究的热点之一。
本文以抗癌植物喜树、红豆杉、三尖杉和长春花作为研究材料,通过对内生菌分离过程中消毒剂的选择、表面消毒方法、分离培养方法和培养基选择等方面的比较研究,确定了本实验分离内生放线菌的最佳条件和方法。采用植物组织破碎法,从三尖杉、红豆杉、长春花以及喜树四类药用植物的根、茎、叶不同部位分离到了内生真菌921株,细菌388株,放线菌72株。
对部分内生菌的发酵液进行抗癌抗菌活性检测的结果显示,大部分的内生菌发酵液对癌细胞A549显示出较强的抗癌活性。有30%的受试真菌对节梨孢属有抑制作用。活性筛选的结果再次表明,药用植物内生菌是一类具有开发新药物巨大潜力的微生物资源。
通过发酵液预处理,利用薄层层析(TLC)和HPLC的方法来检测发酵液中是否存在目标化合物喜树碱(CPT)、长春新碱(VCR)、三尖杉酯碱和紫杉醇等化合物。通过对分离到的内生菌的分析,两株内生放线菌产生喜树碱及其类似物。
通过形态学和细胞化学组分分析以及16S rRNA序列分析,初步确定了菌株YIM 59033和菌株YIM 59059的分类地位,它们分别属于Streptomyces sanglieri和saccharopolyspora gregorii中的一个菌株。