蜘蛛丝(Spider silk)是一种天然蛋白纤维材料，因其卓越的材料学性质被广泛认知。同时，作为一种生物大分子多聚物，有着良好的生物兼容性且易于生物降解，被越来越多的用于药载运输和细胞组织工程等多领域的研究。圆网蜘蛛可分泌六种蛛丝纤维，其中次壶腹腺丝（又称临时捕获丝）主要用于加固蛛网和捕猎等，具有和牵引丝相似的优良品质，但不同的是，在水环境中临时捕获丝不发生超收缩现象，这一特点使其具有特殊的应用价值。但是，由于蜘蛛自身同类相残的习性，以及产丝量小的特点，无法通过大规模人工饲养的方法来获取蛛丝纤维。随着基因工程的快速发展，越来越多研究尝试利用基因重组表达和后期放生的方法来获取人造蛛丝　　为了进一步解析蛛丝蛋白质结构与功能，探索蛛丝蛋白成丝机理，制备良好的仿生材料储备大量可溶蛛丝蛋白。本课题旨在酵母表达体系中分段表达次壶腹腺丝基因，之后通过intein介导的体外拼接技术，获得天然的全长次壶腹腺丝蛋白产物。为此，本研究通过PCR扩增获得大腹园蛛Misp天然基因，以其内部intron为界分为两段，分别融合his-tag及split-intein的N端或C端，构建了4对不同的表达克隆。尝试在Pichia pastoris表达，优化，纯化，获得较高表达水平，进而通过split-intein的体外剪接，将两段蛋白产物以肽键连接起来，以期获得全长蛋白。　　本研究中，采用两种菌株、两种intein成功构建了4对克隆并在Pichia pastoris实现其中一对GS115:P1-SXN，GS115:P2-SXC表达，纯化。　　在对P1-SXN序列表达的过程中，在Pichia pastoris中摸索表达条件，对其进行优化;同时，在E.coi1中和实现了对照组BL21(DE3):P1-PKT的表达，并以此作为参照，通过SDS-PAGE和Western blot analysis，比对了两种表达系统Pichia pastoris和E.coi1对Misp天然基因表达情况。结果表明P1-SXN在两种表达系统中均可实现可溶性表达，而GS115经初步优化，表达产量能达到原来的6-7倍，是BL21(DE3)的2-3倍，而纯化效率是BL21(DE3)的5-7倍。由此证明，Pichia pastoris表达系统更适合重复度高以及富含Gly/Ala的天然蛛丝编码基因的表达。　　同时，在对GS115:P2-SXC表达过程中发现，由于其携带的intein:sx-s0的原因，容易出现断裂等现象，影响后续实验的进行。因此本研究需要继续尝试另外3对克隆的表达，在现有实验的基础上，进一步优化，扩大培养，获得足够的目的蛋白，实现intein的体外拼接，获得天然的全长蛋白。　　本研究为表达全长天然MiSp编码序列提供前期实验基础，也为大规模蛛丝蛋白的重组表达建立了平台。