重组人粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子对牙龈创伤愈合的影响

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目的:创伤愈合是医学研究的一个重要课题,其中包含着复杂的细胞、生长因子和细胞因子之间的相互作用。粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(Granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)是一种造血生长因子,近些年的动物实验及临床试验都表明其局部应用可以促进皮肤及肠粘膜的急性和慢性的创伤愈合。口腔是一个复杂的有菌环境,牙周组织的创伤尤其在牙周手术后牙龈的创伤极为常见,但将GM-CSF引入牙周领域,国内外都少有报道。人类重组GM-CSF(recombinant human granulocyte-macrophage colonystimulating factor,rhGM-CSF)基因在被首次克隆表达后逐渐应用于临床,因此本文旨在通过组织形态学研究rhGM-CSF对于皮肤创伤过程中各种修复细胞的作用是否在牙龈创伤修复中同样有效,为日后rhGM-CSF在口腔临床治疗领域的应用奠定基础。方法:4月龄雄性大耳白兔16只,牙周探针测量探诊深度≥2mm,随机将其分为实验组和对照组2组。每个样本取上下前切牙的牙龈为研究对象,采用手术刀切除唇侧牙龈2mm。术后每日7:30常规进食、水。9:00清除残余食物及饮水,实验组动物使用医用棉签沾取rhGM-CSF凝胶均匀涂于牙龈创面,对照组动物则以生理盐水取代药物同法处理。12:00如上法第二次上药。15:00再次进食、水。16:30清除残余食物及饮水,第三次上药。每日如此,同时肉眼观察,创面愈合情况,直至动物被处死。在术后3、7、11、15天,两组各随机抽取2只动物处死,截取手术区牙、牙龈及部分骨标本,4%多聚甲醛处理后,常规脱钙包埋后,沿唇舌向切片,并行HE和增殖细胞核抗原(Proliferating Cell NuclearAntigen,PCNA)染色,用配有OLYMPUS照相机的光学显微镜进行观察。对于PCNA染色,同时统计400倍视野下PCNA阳性细胞数目,测量3个不同的视野取均值做记录,统计方法应用两独立样本t检验。结合肉眼观察结果及两种染色方法的结果,评价rhGM-CSF对于牙龈创伤愈合是否具有促进作用。结果:肉眼观察结果:第3天,实验组与对照组牙龈受损处均表现出红肿,上覆盖白色伪膜且探之易出血,两组无明显差异。第7天及第11天,两组炎症状况均减轻,但实验组较对照组具有更厚的肉芽组织。第15天时,两组炎症均基本消退,且有明显的肉芽组织生成,肉眼观无明显差距。HE染色结果:实验组的牙龈组织在第3天表现出更明显的炎细胞浸润,在第7天新生血管化的程度更加显著,在第11天拥有更广泛的成纤维细胞的增殖,但至第15天时两组的创伤都已基本恢复正常,实验组较对照组胶原纤维略显粗大,但两组间差异不明显。PCNA染色结果:实验组在第3天创面周围的上皮细胞增殖明显,在第11天位于创面的上皮细胞的增殖更加显著,而在第11天及第15天成纤维细胞的增殖更为突出。结论:rhGM-CSF可以促进牙龈组织中炎细胞的浸润、血管的新生、上皮细胞及成纤维细胞的增殖,其对于牙龈组织创伤过程中修复细胞的作用与对皮肤组织的作用相一致,rhGM-CSF能促进牙龈组织创伤愈合。
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