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(第一部分)
为了解我国痢疾流行区志贺菌流行及耐药情况,从流行区收集150株临床分离志贺菌作血清分型与药敏试验。结果表明志贺菌感染的治疗不宜选用萘啶酸、奥格门丁、复合磺胺和氨苄青霉素,应选庆大霉素、诺氟沙星或环丙沙星。根据生化反应和显微镜形态观察,26株血清学试验阴性的细菌可排除志贺菌。
(第二部分)
氟喹诺酮类抗菌药是目前临床治疗志贺菌感染的首选用药,但志贺菌流行株对诺氟沙星和环丙沙星的耐药率已分别达到15.5%和16.4%。结果发现,喹诺酮敏感福氏志贺菌的gyrA基因与标准株相比在4个位点上存在变异(G1176-A、T1491-C、A2432-G和T2586-C),序列同源性达99.8%。4个碱基位点的变异中,仅A2432-G可造成氨基酸残基的改变,即Glu811-Gly(E811-G),两株细菌GyrA氨基酸序列同源性达99.9%。由于该流行株对喹诺酮类敏感,推测Glu811-Gly与喹诺酮类耐药无关。
(第三部分)
根据喹诺酮敏感志贺菌gyrA序列设计PCR引物扩增包含上述喹诺酮类耐药相关位点的gyrA基因片断,用SSCP和测序等方法检查喹诺酮类耐药株是否存在gyrA基因突变,并采用统计学方法检验突变与喹诺酮类耐药的相关性。测序结果显示志贺菌流行株存在两类gyrA突变:C42-T单位点突变(Ser83-Leu)和C42-T&A54-G双位点突变(Ser83-Leu&Asp87-Gly)。卡方检验显示C42-T突变与志贺菌流行株耐受萘啶酸相关,而A54-G突变与志贺菌流行株耐受诺氟沙星、环丙沙星相关。用PCR-SSCP检测gyrA突变,结果显示gyrA两种突变类型均可通过PCR-SSCP检出。用标准片断作参照,PCR-SSCP可用于检测志贺菌流行株是否发生gyrA突变及发生何种类型突变,有助于应用分子诊断检出细菌的耐药性。