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目的：采用高保真DNA聚合酶介导的基因突变敏感性分子开关准确、快速检测β地中海贫血基因突变。方法：首先提取正常人血液基因组DNA，根据已知中国人群β珠蛋白基因热点突变CD41-42、IVS-2nt654、TATAbox-28、CD17、CD71-72及CD26区域序列，分别设计引入突变位点的扩增引物，利用低保真酶进行引物延伸反应，将其PCR产物克隆到pMD19-T载体，得到β地中海贫血常见的六个突变位点的基因突变克隆：CD41-42、IVS-2nt654、TATAbox-28、CD17、CD71-72及CD26。然后以这六个突变位点为检测靶点，分别设计3’末端与野生型基因位点或突变型基因位点配对的引物，硫化磷酸修饰后偶联高保真DNA聚合酶构成基因突变敏感性分子开关。首先在不同体系分别对含有相应突变位点的六个阳性质粒模板及正常人基因组DNA模板进行引物延伸反应，并通过凝胶成像系统对其进行分析；然后在同一体系中同时对含有相应突变位点的六个阳性质粒模板及正常人基因组DNA模板进行引物延伸反应，并通过凝胶成像系统对其进行分析；最后对已知分别含有CD26和TATAbox-28突变位点的病人DNA样本进行检测。结果：在不同反应体系分别对六个热点突变进行检测。结果显示，使用正常人的染色体DNA样本，该方法仅能使野生型等位基因相关引物得以延伸，而突变型等位基因位点特异性引物不能被延伸。反之，使用突变质粒模板，该方法仅能使突变型等位基因位点相关引物得以延伸，而野生型等位基因位点特异性引物不能被延伸。在同一反应体系同时对以上热点突变进行检测。同样，完全配对引物能被延伸，不完全配对引物不能被延伸。对分别含有CD26和TATAbox-28突变位点的病人DNA样本进行检测，与含CD26突变位点的病人DNA模板配对的突变引物有产物，不配对的无产物；与含TATAbox-28突变位点的病人DNA模板配对的突变引物有产物，不配对的无产物。结论：1.成功获得可用于基因检测技术研发的人工突变的地中海贫血基因突变阳性模板；2.高保真聚合酶介导的突变敏感性分子开关对β地中海贫血基因单一热点突变有较高的特异性和敏感性；3.高保真聚合酶介导的突变敏感性分子开关可用于多重PCR快速筛查β地中海贫血基因热点突变。