链霉菌催化芳香羰基不对称还原及其关键酶的克隆表达

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手性芳香醇是医药、农药以及其他精细化学品的重要原料或中间体。生产手性芳香醇的一种重要方法是芳香羰基化合物的不对称还原。目前,化学和工业上还原芳香羰基的常用方法是化学还原法,但是此方法具有产率低、过程复杂、条件苛刻、存在严重的环境污染等问题。羰基的生物不对称还原方法具有效率高、选择性强、成本低、装置简单、环境污染少、高效、绿色等优势。本论文以筛选获得链霉菌及其关键羰基还原酶高效还原手性芳香酮为目的,为其在工业等领域的应用提供了理论支持。本论文工作获得以下结果:(1)从国家南方农药创制中心(上海基地)菌种保藏库中的天然放线菌库中筛选出一株具有立体性还原羰基化合物能力的链霉菌菌株Streptomyces sp. DUT002。此链霉菌在pH值6.5-7.5、温度为30-37℃时生长良好;对苯乙酮不对称还原产率为85%,手性e.e.值为10%,而对3′-氯-苯乙酮的产率为100%,手性e.e.值为83%;以有机溶剂DMSO作为助溶剂可提高菌体还原效率;反应的最佳辅助底物为葡萄糖,水溶性氧化还原介体AQDS的加入可以促进转化效率提升。(2)从链霉菌Streptomyces avermitilis MA-4680中,成功调取得到醇脱氢酶(ADH)的基因片段adh,连接到表达载体pET43.1a(+)-上,转入大肠杆菌宿主BL21(DE3)plysS中构建得到重组菌。经过IPTG诱导表达,得到重组酶。利用Ni-NTA Agarose亲和层析,从重组菌中纯化出了重组ADH,重组ADH对苯乙酮和大环刚性的芳香取代酮2-氯-芴酮具有生物催化活性。
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