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背景近些年来我国的高血压患者发病率亦有着逐年上升的趋势,且有年轻化倾向。对高血压病的起病原因、预防及治疗的研究早已成为一项重要的课题,而中药具有一人一方、精准化治疗、改善患者整体症状等优势,是极具潜力的研究方向。三草降压汤(Sancao Decoction,SCD)是北京中医药大学刘渡舟教授治疗肝火亢盛证高血压病的经验方,由夏枯草、龙胆草、益母草、芍药、甘草组成。因其方中含有三草,且降压效应确实,故取名三草降压汤,经数十年临床验证,降压效果确切,并且可有效防治高血压并发症。目前虽已有大量文献从中西医角度对其降压机制进行阐释,但均疏于浅表,未对其降压作用的分子学机制进行深入研究。现代研究表明,肝火证候、高血压、炎症反应三者间存在密切关系,故本研究拟从SCD对炎症反应的调控角度,探究SCD发挥降压作用的具体生物学机制。目的通过网络药理学研究,挖掘SCD潜在核心靶点,预测其降压作用通路。通过观察SCD对肝火亢盛型高血压大鼠的血压、中医证候学、左心室肥大以及心肌组织NF-κB/NLRP3/IL-1β信号通路调控的影响,以探索SCD的药效、靶器官保护作用和其发挥降压作用的具体机制,以期为中西医结合治疗高血压提供新的思路。方法1.通过TCMSP数据库分别查询SCD成分化合物及对应靶标,以NCBI Gene数据库检索高血压靶标,将二者靶基因融合,构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网路。从中PPI网络中提取核心靶点,采用DAVID数据库对其进行通路富集分析,筛选SCD降压的具体作用机制。2.从自发性高血压大鼠(SHR)中筛选为肝火亢盛证者,分为5组:模型组、卡托普利组(30mg/kg)、SCD高剂量组(21.2g/kg)、SCD中剂量组(10.6g/kg)、SCD低剂量组(5.3g/kg),以WKY大鼠为空白对照组(WKY组),每组10只,药物干预8周。治疗期间观察血压、旷场实验、旋转耐受时间、易激惹程度、宏观表征等变化。治疗结束后,计算心脏重量指数与左心室重量指数;使用HE染色法观察左心室病理损伤;采用Masson染色法观察心肌纤维化程度;采用ELISA法检测血清中TNF-α、IL-1β含量;采用Western blot法检测心肌中NF-κB p65、NF-κB p-p65、NLRP3、Caspase-1、ASC、IL-1β蛋白的表达;采用QPCR法检测心肌NF-κB、NLRP3、Caspase-1、IL-1βmRNA的表达;采用免疫组化法检测心肌NF-κB、NLRP3、IL-1β的积分光密度值。结果1.网络药理学研究表明:通过检索TCMSP及进一步筛选,得到了SCD的123个靶蛋白,进而通过构建出的PPI网络图识别出了SCD的116个核心靶点蛋白,最终通过KEGG通路分析,分析出NF-κB/NLRP3/IL-1β信号通路为SCD潜在调控通路,并对其进行后续研究。2.SCD对血压及肝火亢盛证证候的影响:治疗8周后,与模型组相比,(1)高、中剂量SCD和卡托普利都可显著降低SHR动脉收缩、舒张压。;(2)各治疗组间心率及体重均无统计学差;(3)中剂量组的旷场实验穿格次数明显减少,而其他组无差异,各治疗组见旷场实验直立次数间无差异;(4)高剂量组与中剂量组均可显著增加SHR旋转耐受时间;(5)各治疗组间易激惹程度评分无显著性差异;(6)高剂量组与中剂量组均可显著增加大鼠宏观表征得分。3.SCD对左心室肥厚的影响:(1)心脏重量指数结果显示:各治疗组间无显著性差异,左心室重量指数结果显示与模型组相比,卡托普利组与中剂量组都出现了显著性降低;(2)HE染色结果显示:模型组大鼠左心室组织可见明显心肌横径增大,肌纤维排列紊乱,部分断裂,心肌间小血管动脉壁增厚,伴有纤维组织增生,并可见炎细胞浸润灶,而卡托普利组、SCD高中低剂量组与模型组相比,病理损伤明显减轻;(3)Masson染色结果显示:模型组肌间质中蓝色胶原纤维明显增多,而卡托普利组、SCD高中低剂量组的胶原纤维数则出现不同程度的下降;(4)胶原容积分数测定显示:卡托普利组与中剂量组的积分都出现了显著性降低。4.SCD对NF-κB/NLRP3/IL-1β信号通路的影响:(1)血清TNF-α、IL-1β结果显示:与WKY组相比,模型组出现二者含量的显著升高;与模型组相比,高、中剂量组及卡托普利组TNF-α含量出现显著下降,高、中剂量组IL-1β含量显著下降;(2)WB检测结果显示:模型组相较WKY组,NF-κB p65、NF-κB p-p65、NLRP3、Caspase-1、ASC、IL-1β蛋白的表达出现显著性升高,而各治疗组均会使其有不同程度的降低,QPCR、免疫组化结果显示出了大致相同的趋势。结论1.网络药理学研究预测得到NF-κB/NLRP3/IL-1β信号通路在SCD治疗高血压是起着重要作用。2.SCD在降低SHR血压的同时,能够改善肝火亢盛证症状。3.SCD能够改善SHR左心室肥厚的程度,保护靶器官。4.SCD能够下调NF-κB/NLRP3/IL-1β信号通路相关蛋白的表达,从而抑制炎症反应,这可能是其发挥降压、靶器官保护作用的分子学机制。