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背景与目的流产是妊娠最常见的并发症,指胚胎在达到存活能力前出现妊娠中止的情况。大约10-15%的妊娠妇女会发生流产。流产可能是单次,也可能是多次。复发性流产是指与同一性伴侣连续发生3次或3次以上的自然流产,但目前美国生殖医学学会和欧洲人类生殖与胚胎学会均认为发生2次及2次以上的流产即为复发性流产(RSA)。研究报道,如果仅包括经超声或组织学证实的临床流产,患病率为0.8%～1.4%;增加生化妊娠可使患病率增加至2%～3%,目前关于RSA的患病率仍很难准确估计。但近年来复发性流产的发生率总体呈上升趋势。RSA显著影响女性及其伴侣情感,增加个人焦虑和失败感,此外反复妊娠丢失会增加宫腔粘连和不孕几率。但RSA病因复杂,临床上很难确诊病因,成为妇产科领域难题之一。近年来有研究发现,在妊娠早期,血管内皮生长因子(VEGF)对于卵母细胞的成熟、滋养层细胞的增殖、胚胎的植入和发育、胎盘的血管生成以及母体和胎儿血管在子宫内的生长都是至关重要。在妊娠早期HIF1-α可作为氧张力的介质参与滋养层分化;有研究证实高表达CD81可抑制滋养细胞的增殖、迁移、侵袭和血管生成,并影响与子痫(PE)发病有关的螺旋动脉重塑过程,降低细胞滋养细胞的侵袭能力。RSA的发生是否与CD81有关,目前国内外尚未见报道。本研究通过比较早期RSA患者和正常早孕妇女绒毛组织中CD81、VEGF及HIF1-αmRNA及蛋白水平的变化,探讨CD81、HIF-1α、VEGF与早期RSA的相关性及其在早期RSA发生中的预测作用。资料和方法1研究对象与分组选取2017年1月～2018年1月期间就诊于郑州大学第三附属医院产科门诊的早期RSA患者30例,同时筛选出30例12周前正常早孕并要求终止妊娠的妊娠妇女。所有研究对象为汉族,年龄21~45(30.430±5.143)岁,孕周<12周,孕前TORCH检测无异常,无肝炎、人类免疫缺陷等病毒感染。本研究已通过郑州大学第三附属医院医学伦理委员会批准。本研究分为早期RSA组和正常早孕组,具体分组如下:早期RSA组:纳入者均有≥2次的无诱因自然流产史,就诊时B超确诊胚胎停育。均排除胎儿染色体异常、生殖器官异常、生殖道感染、抗心磷脂抗体阳性、TORCH检测结果示近期感染、甲状腺功能异常、凝血功能异常、近期接触过重金属等毒物、近期生活中发生重大事件。正常早孕组:选择同期因非计划妊娠要求终止而就诊的12周前的正常早孕妇女,B超可见孕囊及原始心血管搏动,既往至少有1次正常妊娠史,且无自然流产等不良妊娠史。2实验方法(1)采用实时荧光定量PCR法对绒毛组织中CD81、VEGF及HIF-1α水平进行检测;(2)采用蛋白印迹法对绒毛组织中CD81、VEGF及HIF-1α水平进行检测;(3)采用Pearson相关性分析了解CD81、VEGF及HIF-1α之间的相关性;(4)ROC曲线评估CD81、VEGF及HIF-1α对早期RSA的预测价值。3统计学方法采用SPSS21.0和Medcalc软件进行统计学分析。使用Kolmogorov-Smirnov检验数据的正态性(P>0.05为正态分布)。不符合正态分布时使用Kolmogorov-Smirnov Z秩和检验,计量资料的描述采用(M,IQR);正态分布的计量资料采用sx±表示。采用Pearson相关性分析CD81、VEGF及HIF-1α之间的关系。对于RSA的预测价值应用受试者工作特征(ROC)曲线进行分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果1一般资料比较两组女性的年龄、停经时间、孕次、产次、收缩压、舒张压、BMI等一般资料分别比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。2 qPCR分析CD81、HIF-1α、VEGF mRNA的表达早期RSA组妇女绒毛组织中CD81、HIF-1αmRNA水平(2.203±0.814、1.056±0.414)高于正常早孕组(1.553±0.513、0.842±0.347),VEGF mRNA水平(0.406±0.246)低于正常早孕组(0.682±0.269),分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。3 Western blot分析CD81、HIF-1α、VEGF蛋白的表达早期RSA组妇女绒毛组织中CD81、HIF-1α蛋白水平(0.472±0.082、0.616±0.070)高于正常早孕组(0.382±0.088、0.519±0.087),VEGF蛋白水平(0.324±0.056)低于正常早孕组(0.375±0.076),分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。4 CD81、HIF-1α、VEGF在早孕期RSA中表达的相关性早期RSA组蛋白表达量中:VEGF与CD81呈负相关性(r=-0.415,P<0.05),与HIF-1α成呈正相关性(r=0.560,P<0.05);RSA组mRNA表达量中:VEGF分别与CD81成负相关性(r=-0.365,P<0.05),与HIF-1α成呈正相关性(r=0.608,P<0.05)。正常早孕组间各指标无相关性(P>0.05)。5 ROC曲线对RSA的预测价值比较CD81、HIF-1α、VEGF mRNA及三者联合中任意两组因子的面积之间的差异、95%CI、Z值、P值、NRI值,显示:CD81、HIF-1α、VEGF mRNA表达量三者中任意两因子预测RSA的效果无明显差异性(P>0.05),任一因子与三者联合预测比较,均有统计学意义(P<0.05,NRI<0)。比较CD81、HIF-1α、VEGF蛋白及三者联合中任意两组因子的面积之间差异、95%CI、Z值、P值、NRI值,显示:CD81、HIF-1α、VEGF蛋白表达量三者中任意两因子预测早期RSA的效果无明显差异性(P>0.05),任一因子与三者联合预测比较,均有统计学意义(P<0.05,NRI<0)。结论1早期RSA组妇女绒毛组织中CD81、HIF-1αmRNA高表达,VEGF mRNA低表达;2早期RSA组妇女绒毛组织中CD81、HIF-1α蛋白高表达,VEGF蛋白低表达;3在早期RSA组中,VEGF表达与CD81呈负相关性、与HIF-1α呈正相关性;4 ROC曲线预测早期RSA发生中,CD81、VEGF及HIF-1α联合预测价值优于单一因子。