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猪瘟(CSF)是由猪瘟病毒(CSFV)引起的一种高度接触性热性传染病。该病以出血和发热为主要特征,并引起妊娠母猪流产、胎儿畸变、慢性营养性消耗、淋巴细胞和血小板减少等免疫系统受损、继发或并发细菌及其他病毒感染等临床表现,呈急性或慢性经过,是一种对猪危害性极大的传染病,被国际兽疫局(OIE)列为须申报的疾病。
一直以来我国采用猪瘟疫苗免疫对猪瘟进行预防控制,在降低猪瘟感染率及发病率方面取得了较好效果,但是近年来在实际生产中猪瘟仍有发生。为了了解山东省内CSF的流行情况,本研究重点从血清学和病原学方面进行研究,从而为本病的预防控制提供理论依据。
本研究主要包括以下三个方面内容:
1、利用IDEXX公司猪瘟(CSFV)抗原、抗体检测试剂盒,对山东省不同地区15个规模化免疫猪场中,9个猪场的678份血清进行抗体检测,6个猪场的180份全血进行抗原检测。结果山东省9个规模化猪场进行猪瘟疫苗免疫后猪群的平均CSF抗体合格率达70.80%,但仍有部分猪场免疫效果较差,合格率仅为50.50%。猪场的猪瘟带毒现象较为普遍(16.70%),所以猪瘟仍然是现阶段规模化猪场必须重视的重要疫病。
2、通过RT-PCR方法对2009年4月至9月送检的来自山东各地的20份猪瘟疑似临床病料进行了检测,共检测出6份为CSFV阳性。将6份猪瘟阳性病料接种PK-15细胞进行增殖,并未发现细胞病变,对其进行RT-PCR检测,结果这6份样品均为阳性,证明分离得6株猪瘟病毒,分别命名为QH,CQ-1,CQ-2,JY,LZ,YS。
3、本试验以这6株分离病毒作为研究对象,根据GenBank发表的序列,利用Primer5.0设计并合成一对针对猪瘟病毒Erns基因主要抗原编码区序列的特异性引物,用RT-PCR方法扩增出一段648bp的基因片段,将其克隆入pGM-T载体,转化感受态大肠杆菌DH5α。提取pGM-T-Erns重组质粒,进行PCR与双酶切鉴定,将阳性质粒测序,并且经DNAstar软件对测序结果与HCLV疫苗株,Shimen株及Alfort株Erns基因及蛋白进行序列比较和分析,构建了CSFV遗传进化树。结果表明,扩增的6株山东CSFV分离株Erns基因同源性为98.5%-100.0%,与HCLV疫苗株,Shimen株及Aflort株的同源性为82.9%-85.2%;6株CSFV分离株Erns蛋白的同源性为99.1%-100%,与HCLV疫苗株,Shimen株及Aflort株Erns蛋白的同源性分别为88.0%-88.4%和89.4%-89.8%。说明所分离的6株山东CSFV流行毒株的Erns基因发生了较大变异。