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目的:
以中药生地免煎颗粒溶液灌胃的方式干预MCAO模型大鼠,通过观察造模后不同时间窗三类影响神经损伤与再生的基因的表达,探讨中药生地对缺血性脑损伤后治疗的潜在价值。
方法:
选用雄性SD大鼠,采用线栓法制作MCAO模型之后,随机将大鼠分为生地免煎颗粒用药组、模型组与假手术组,每组27只,造模后第2天起,生地免煎颗粒组采用生地免煎颗粒溶液灌胃、模型组和假手术组采用等量过滤清洁自来水灌胃,分别在造模后第3天、第7天和第14天取材。在同一时间点,每组各取3只依次经预冷生理盐水和4%多聚甲醛溶液灌注后取脑,作HE染色,观察缺血区脑组织形态学改变,其余6只经心脏灌注预冷生理盐水后开颅取脑,行实时荧光定量PCR与Western Blot检测,观察以下指标:
(1)通过观察生地对神经损伤后细胞凋亡相关基因Bcl-2、BaxmRNA的表达,探讨生地对缺血性脑卒中神经损伤保护的机理;
(2)通过观察生地对神经生长抑制因子Nogo基因的Nogo-AmRNA、Nogo-A蛋白受体NgRmRNA的表达以及对神经生长抑制因子Nogo-A与NgR蛋白表达的干预,探讨生地解除神经生长抑制因子抑制作用的可能性;
(3)通过观察生地对神经生长因子(NGF)与神经生长相关蛋白(GAP-43)基因mRNA的表达,观察生地对中枢神经损伤后的神经生长有无促进作用。
结果:
(1)生地免煎颗粒对MCAO造模后造成的Bcl-2mRNA的表达没有明显影响;
(2)生地免煎颗粒能够在一定程度上下调MCAO造模后BaxmRNA的表达水平,且其发挥作用的时间在用药后7天左右;
(3)生地免煎颗粒能够在一定程度上下调MCAO造模后Nogo-AmRNA的表达水平,且其发挥作用的时间在用药后7天左右;对MCAO造模后引起的Nogo-A蛋白表达升高有一定的下调作用,这种表现在造模后第14天时更为明显;
(4)生地免煎颗粒对MCAO造模后NgRmRNA表达的影响较为复杂,需要进一步研究探讨;对MCAO造模后引起的NgR表达升高有一定的下调作用,这种表现在造模后第14天时更为明显;
(5)以按体表面积折算相当于成人10倍量的生地免煎颗粒溶液灌胃的方式干预MCAO模型大鼠,在3-14天期间,对NGFmRNA和GAP-43mRNA的表达,未发现有明显的影响。
结论:
通过生地免煎颗粒溶液灌胃的方式干预大鼠MCAO模型,观察不同时间点对三种类型基因表达的干预,能够在一定程度上对三种基因的表达产生影响。
生地免煎颗粒能够抑制Bax基因的表达,其发生作用的时间大致在用药后7天左右,这可能是生地及其组分发挥脑缺血损伤保护作用的机制之一。
生地免煎颗粒能够在一定程度上抑制Nogo-A蛋白及其受体NgR的表达,从而对缺血性脑损伤后神经再生起到一定的帮助作用。
以按体表面积折算相当于成人10倍量的生地免煎颗粒溶液灌胃的方式干预MCAO模型大鼠,在3-14天期间,未发现有明显的促进神经再生的作用。