【摘 要】
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目的:本实验以EAE小鼠为动物模型,应用雷帕霉素(Rapamycin,Rapa)进行干预,通过weaver(15分)法对EAE小鼠的神经功能进行评分,以评估各组小鼠发病情况,通过HE染色,研究Rapa对EA
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目的:本实验以EAE小鼠为动物模型,应用雷帕霉素(Rapamycin,Rapa)进行干预,通过weaver(15分)法对EAE小鼠的神经功能进行评分,以评估各组小鼠发病情况,通过HE染色,研究Rapa对EAE小鼠脊髓炎症浸润的影响,通过RT-PCR技术,从转录水平检测EAE小鼠脊髓中细胞因子:IFN-γ、IL-17m RNA的表达,分析Rapa对EAE小鼠的炎症抑制作用。通过上述实验探讨Rapa对EAE小鼠的抑炎作用,从而为指导多发性硬化的临床用药提供基础实验依据。方法:将C57BL/6,小鼠8-10周,18–20g,无特殊病原体(SPF)环境中的条件下。暗/亮周期为12小时,并定时给小鼠提供鼠粮和清洁饮用水。随机分成Rapa组、EAE组和control组。EAE组及Rapa组以MOG35-55为抗原,完全弗式佐剂(CFA)、结核菌素以及百日咳毒素为辅剂于脊柱两侧分四点皮下注射建立EAE动物模型,EAE组和Rapa组建立动物模型,control组不予免疫。Rapa组就免疫当天开始给药,Rapa组每日于固定时间8:00和16:00给予剂量(1.0mg/kg)进行灌胃。EAE组及control组小鼠同时给予等量安慰剂灌胃。于免疫第1天开始,采用双盲法每日早晚(8:00和16:00)两次由两名观察者对各组小鼠的发病情况进行评估,并进行高峰期神经功能评分,直至处死。在免疫后第21天对各组小鼠进行处死和取材,取各组脊髓的部位,进行HE染色;取各组小鼠的脊髓部位应用RT-PCR技术检测IFN-γ、IL-17的m RNA转录表达水平。结果:1.各组小鼠发病情况:在高峰期(第21天)中,Rapa组小鼠临床症状的神经功能评分明显低于EAE组,在临床症状的神经功能评分中Rapa组与EAE组比较差异有统计学意义(p<0.05)。2.HE染色:在发病21天时,EAE组和Control组相比较显示:EAE组小鼠脊髓组织中的炎性细胞浸润数明显增多,在Rapa组与EAE组相比时显示:Rapa组小鼠脊髓组织中的炎性细胞浸润数明显减少。3.RT-PCR:各组小鼠脊髓中细胞因子IFN-γ、IL-17m RNA的表达比例:EAE组和Control组相比,EAE组小鼠的细胞因子IFN-γ、IL-17m RNA的表达比例明显升高,Rapa组与EAE组相比,Rapa组小鼠脊髓中细胞因子IFN-γ、IL-17m RNA比例显著降低,并有统计学差异(P<0.05)。结论:1.Rapa可降低小鼠临床症状的神经功能评分。2.Rapa可减轻EAE小鼠脊髓组织的炎性细胞浸润程度。3.Rapa可显著降低小鼠脊髓中细胞因子IFN-γ、IL-17m RNA的表达比例,并差异有统计学差异(P<0.05)。
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