何首乌组织培养的研究

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近年来,由于自然环境的破坏、无计划的采挖和栽培技术等原因,使得何首乌药用资源的供应困难。因此,将何首乌野生变家种势在必行,其优良种苗选育和繁殖、品质的提高便成了重要的研究课题。本文通过何首乌外植体诱导、愈伤组织的诱导与分化、芽体增殖、生根及移栽、大田定植及何首乌块根收获,系统地探讨了何首乌的组培快繁以及组培苗的大田栽培性状。采用HPLC法和分光光度计法,对何首乌的四种不同生长年限的栽培种和一个云南野生种、五个不同产地的制首乌中二苯乙烯苷、大黄素、总黄酮的含量进行测定与比较。这些研究为何首乌组织培养快速繁殖、种质资源保存及人工栽培提供重要参考依据,对解决市场需求有重要意义。试验结果表明:1.何首乌组织培养的基本培养基以MS效果最佳。2.芽是组织培养快繁的最佳外植体,12min是适宜的灭菌时间。3.在何首乌组织培养中,白砂糖的作用与蔗糖相当,可替代蔗糖。4.芽体增殖可作为何首乌组织培养的主要增殖途径。5.不同浓度配比的生长素和细胞分裂素对芽体增殖会产生不同的影响。具体表现为:6-BA和IAA组合中,6-BA1.5mg/L +IAA0.8mg/L的增殖系数最高,为7.6;6-BA和IBA组合中,6-BA1.5mg/L +IBA0.3mg/L的增殖系数最高,为8.8;6-BA和NAA组合中,6-BA1.0mg/L+NAA0.025 mg/L的增殖系数最高,为6.8;6-BA、NAA和IBA组合中,6-BA0.75mg/L +NAA0.01mg/L+IBA0.1mg/L的增殖系数最高,为6.4。此外,不同细胞分裂素对芽体增殖的影响也不同,6-BA的增殖效果明显优于KT、ZT。因此,芽体增殖的最适培养基激素为6-BA1.5mg/L +IBA0.3 mg/L。6.不同基本培养基对芽体增殖影响大小排序为:MS>B5>1/2MS>N6>ER;椰汁对芽体增殖有一定的促进作用。7.何首乌的茎段和芽的愈伤组织诱导要优于叶片和块根;光培养较暗培养更有利于愈伤组织的诱导;最适愈伤组织诱导的激素搭配是:MS+6-BA0.5mg/L +2,4-D1.5mg/L;MS培养基中添加罗汉果汁有利于诱导愈伤组织;不同基本培养基对诱导愈伤组织的效果排序:MS>ER>1/2MS>N6>B5。8.在诱导愈伤组织再分化中,单因子6-BA或6-BA与LFS组合或TDZ与NAA组合均有分化芽产生,最佳激素组合是:TDZ0.3mg/L +NAA0.05mg/L。9.生根壮苗培养基以1/2MS+IBAO.3mg/L+NAA0.05mg/L+0.2%的活性炭,生根效果最好;生根所需的白砂糖浓度以2%为最好。10.炼苗移栽的方法中以不打开瓶盖或打开瓶盖三天再移栽最佳。11.野生生首乌与组培苗种植的生首乌相比,其总黄酮、二苯乙烯苷、大黄素含量要高。随着组培苗栽培年份的增加,其生首乌的总黄酮、二苯乙烯苷、大黄素的含量也越随之提高。五种不同产地的制首乌的总黄酮、二苯乙烯苷含量、大黄素差异较大,以河南,湖南的含量相对较高,广西、四川、广州的含量相对较低。不同生长年限的何首乌三种有效成分含量的排序顺序均为:三年生>两年生>一年生>半年生,云南野生种的含量比三年生的栽培种略高一些;五个不同产地的制首乌中,河南与湖南的品质相对比广西、四川、广州的要好。
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