【摘 要】
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目的:探讨特异抗原黑色素瘤相关抗原亚型3（MAGE-A3）-TCR-T细胞对食管癌的免疫效应。通过TCGA/Gene Card等数据库分析及PCR、免疫组化检测等筛选出食管癌特异抗原黑色素瘤相关抗原亚型3（MAGE-A3）作为本研究的免疫治疗靶点,通过构建MAGE-A3-TCR-T质粒并包装慢病毒后转染T细胞,明确其对食管癌细胞的免疫效应。方法:1.通过TCGA/Gene Card等数据库分析MA
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目的:探讨特异抗原黑色素瘤相关抗原亚型3（MAGE-A3）-TCR-T细胞对食管癌的免疫效应。通过TCGA/Gene Card等数据库分析及PCR、免疫组化检测等筛选出食管癌特异抗原黑色素瘤相关抗原亚型3（MAGE-A3）作为本研究的免疫治疗靶点,通过构建MAGE-A3-TCR-T质粒并包装慢病毒后转染T细胞,明确其对食管癌细胞的免疫效应。方法:1.通过TCGA/Gene Card等数据库分析MAGE-A3基因在食管癌中的表达情况、参与的信号通路以及预后生存等情况。收集新鲜的食管癌及癌旁组织,通过荧光定量PCR及免疫组化检测MAGE-A3基因在食管癌中的表达以及其临床病理特点。2.抽取表型为HLA-A24:02阳性的健康人外周血,提取其T细胞,构建MAGE-A3特异性的T细胞受体质粒并包装慢病毒后转染T细胞,采用非放射性细胞毒性试验检测效应细胞对靶细胞的杀伤效应,ELISA法检测细胞因子IFN-γ、IL-2等分泌水平变化。结果:MAGE-A3在食管癌组织为高阳性表达,其阳性表达率比MAGE-A其他亚型更高,且在正常组织中为阴性表达,因此,选择MAGE-A3作为后续实验靶点。对转染慢病毒的293T细胞质粒目的基因表达进行检测,结果显示,相对于NC组,转染组目的基因表达显著上调,表面质粒构建成功。杀伤实验结果表明,TCR-T细胞株对食管癌细胞KYSE150（MAGEA3+/HLA24:02+）的杀伤效应显著强于NC组及T细胞组。结论:MAGE-A3可作为食管癌有效免疫靶点之一,MAGE-A3-TCR-T细胞对食管癌细胞有显著的杀伤效应。MAGE-A3-TCR-T细胞治疗有可能成为MAGE-A3阳性食管癌的新的治疗手段。
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