目的:　　 NK细胞在肿瘤免疫监视过程中具有重要作用，NK细胞介导的抗肿瘤作用是由活化信号和抑制信号共同整合决定的，活化信号主要是由NKG2D受体与配体的相互识别完成。NKG2D配体的表达可以被环境压力如热休克、氧化刺激、病毒感染等诱导，从而活化NK细胞识别和杀伤肿瘤细胞。高频热疗(HFH)是临床上使用的肿瘤辅助治疗方法，具有增强肿瘤细胞对化疗和放疗敏感性的作用。但高频热疗是否会改变肿瘤细胞NKG2D配体的表达？以及高频热疗增强肿瘤细胞对化疗和放疗敏感性的作用是否与肿瘤细胞NKG2D配体表达的上调有关？则尚未可知。该项目即通过高频热疗对NKG2D配体表达影响的检测及高频热疗处理的肿瘤细胞对细胞因子诱导的杀伤细胞(CIKs)敏感性的分析，为高频热疗结合肿瘤免疫治疗提供科学资料。　　 方法:　　 1.用工作频率为13.56MHz的高频热疗仪（主要参数:温度43℃，最大输出功率1200W，维持输出功率60％-80％）以40min、60min和80min分别处理宣威肺癌XWLC-05细胞，而后用Calcein-AM染色法检测不同高频热疗处理时间对肿瘤细胞的杀伤作用。　　 2.以40min/次，分0次、1次、3次高频热疗处理人乳腺癌MDA-MB-231和宣威肺癌XWLC-05肿瘤细胞，分别进行mRNA提取、cDNA逆转录，荧光定量PCR检测不同细胞中不同频次高频热疗处理后NKG2D配体的mRNA的表达。　　 3.用流式细胞术检测不同频次高频热疗处理后肿瘤细胞表面NKG2D配体蛋白质的表达。　　 4.在体外将正常人淋巴细胞经细胞因子和单克隆抗体诱导成CIK细胞，用乳酸脱氢酶释放分析法测定高频热疗对CIK细胞杀伤肿瘤细胞效力的影响。　　 结果及结论:　　 1.高频热疗处理60min和80min结果显示，XWLC-05肿瘤细胞存活率显著降低(p＜0.05)，提示高频热疗对肺癌XWLC-05细胞具有一定的直接杀伤作用。　　 2.0次、1次、3次高频热疗处理结合荧光定量PCR结果显示，XWLC-05细胞可表达所检测的全部5种NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP2和ULBP3的mRNA，MDA-MB-231细胞不表达ULBP1，仅表达其余4种，提示两种肿瘤细胞表现出一定的配体选择性表达;进一步地，两种细胞均基本表现出随高频热疗处理次数的增加，NKG2D配体的mRNA表达上调的趋势，尤其XWLC-05细胞的配体ULBP1在3次高频热疗处理后mRNA表达量急剧上升，较未处理增加了18.54倍。提示无论是MDA-MB-231细胞还是XWLC-05细胞，高频热疗均基本表现出上调NKG2D配体mRNA表达的作用。　　 3.流式细胞分析结果显示，MDA-MB-231和XWLC-05细胞表面NKG2D配体蛋白含量在高频热疗处理前后没有显著性差异，初步显示高频热疗不影响两类细胞表面NKG2D配体蛋白的表达。　　 4.细胞毒实验结果显示，高频热疗提高了CIK细胞对XWLC-05细胞的杀伤率，提示高频热疗可增强XWLC-05细胞对CIK细胞杀伤的敏感性。上调肿瘤细胞表面NKG2D配体表达可以增强免疫系统对肿瘤细胞的杀伤。上述研究结果和初步结论提示:高频热疗可能可以在一定程度上上调肿瘤细胞表面NKG2D配体的表达，并增强肿瘤细胞对CIK细胞杀伤的敏感性，因此高频热疗可参考作为肿瘤联合免疫综合治疗的辅助手段。