马蔺子素放射增敏作用对MDA-MB231细胞Warburg效应影响的体外研究

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目的本研究将人乳腺癌MDA-MB231细胞作为研究对象,探讨放射增敏剂马蔺子素(Irisquinone)对人乳腺癌MDA-MB231细胞的放射增敏作用,并研究其放射增敏作用在人乳腺癌MDA-MB231细胞照射过程中对MDA-MB231细胞Warburg效应的影响。方法取指数生长期的人乳腺癌MDA-MB231细胞,构建六组细胞模型,分别为空白对照组、马蔺子素组、单纯照射组、马蔺子素+照射组、阴性对照组及转染HKⅡSiRNA实验组。空白对照组予以其他组同等浓度及量的DMSO处理,马蔺子素组予以0.1mmol/L马蔺子素作用24h,单纯照射组予以X射线照射,马蔺子素+照射组予以0.1mmol/L马蔺子素作用24h后进行照射,阴性对照组转染100 pmol无义序列小RNA后予以0.1 mmol/L马蔺子素作用24 h后予以照射,转染HKⅡSiRNA实验组采用转染SiRNA后予以0.1 mmol/L马蔺子素作用24h后予以照射。上述各组细胞经过相应处理后,使用克隆形成实验检测单纯照射组及马蔺子素+照射组MDA-MB231细胞的存活分数,使用单击多靶模型拟合细胞存活曲线并计算马蔺子素的放射增敏比(Sensitization enhancement ratio,SER);用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡情况;通过qRT-PCR和Western blot分别检测各组细胞己糖激酶Ⅱ(HKⅡ)mRNA和蛋白相对表达水平。结果1、马蔺子素+照射组的Dq、Do及SF2较单纯照射组均有所下降,放射增敏比(SER)为1.52。2、流式细胞仪结果显示,空白对照组、马蔺子素组、单纯照射组、马蔺子素+照射组、阴性对照组及转染HKⅡSiRNA实验组的凋亡率分别为(24.71±3.50)%、(26.09±4.09)%、(50.23±3.06)%、(69.09±4.60)%、(69.08±3.14)%、(57.68±2.33)%。马蔺子素组+照射组凋亡率高于空白对照组、马蔺子素组、单纯照射组、转染HKⅡSiRNA实验组,差异有统计学意义(t=13.29、12.09、5.90、3.83,P<0.05),马蔺子素组+照射组与阴性对照组间无明显区别,差异无统计学意义(P>0.05)。而单纯照射组凋亡率高于空白对照组、马蔺子素组,差异有统计学意义(t=9.50、8.18,P<0.05),空白对照组与马蔺子素组之间无明显区别,差异无统计学意义(P>0.05)3、qRT-PCR结果显示,空白对照组、马蔺子素组、单纯照射组、马蔺子素+照射组、阴性对照组及转染HKⅡSiRNA实验组的HKⅡmRNA相对表达量为(0.90±0.07)、(0.91±0.05)、(0.61±0.10)、(0.37±0.07)、(0.37±0.06)、(0.12±0.03)。马蔺子素组+照射组HKⅡmRNA的表达水平低于空白对照组、马蔺子素组、单纯照射组,差异有统计学意义(t=9.14、10.48、3.40,P<0.05),马蔺子素+照射组HKⅡmRNA的表达水平与阴性对照组之间无明显差异(t=0.12,P>0.05),马蔺子素+照射组HKⅡmRNA的表达水平高于实验组,差异有统计学意义(t=5.65,P<0.05)。4、Western blot检测结果显示,空白对照组、马蔺子素组、单纯照射组、马蔺子素+照射组、阴性对照组及转染HKⅡSiRNA组的HKⅡ蛋白表达的相对定量分别为(0.623±0.031)、(0.624±0.013)、(0.388±0.025)、(0.226±0.040)、(0.204±0.017)和(0.095±0.012)。马蔺子素组+照射组HKⅡ蛋白的表达水平低于空白对照组、马蔺子素组、单纯照射组,差异有统计学意义(t=13.39、16.08、5.81,P<0.05)。结论马蔺子素可对人乳腺癌MDA-MB231细胞产生放射增敏作用。而且该作用可通过下调HKⅡ基因的表达,抑制人乳腺癌MDA-MB231细胞的Warburg效应。
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