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一、AML1-ETO9a异构体在伴t(8;21) AML-M2中表达比例的监测及临床意义目的1、研究AML1-ETO9a (AE9a)异构体在伴t(8;21)的急性髓系白血病M2 (AML-M2)中表达比例的变化及其临床意义。2、探讨伴t(8;21)/AML1-ETO9a阳性AML-M2的临床特点。方法1、应用RT-PCR的方法筛选了44例初诊AE9a与AML1-ETO(AE)融合基因共表达的伴有t(8;21)的AML-M2病例。2、应用real-time PCR技术检测这44例多次随访标本中AE9a在AE9a与AE两者总和中百分比的变化,并结合临床资料进行分析。结果1、伴有t(8;21)的44例初诊AML-M2病例中AE表达量高于AE9a;两者表达量成正相关;44例初诊病人经首次标准化疗后AE与AE9a表达量均下降,但初治后AE9a在总体中百分比较初诊时上升(P<0.05);患者经一疗程标准方案化疗后,未达完全缓解(CR)组的AE9a百分比明显高于CR组(p<0.05);化疗后维持CR时复发患者AE9a百分比高于未复发患者(p<0.05);缓解期间,17例复发患者中11例患者AE9a百分比在AE表达低水平时即出现升高甚至异常升高。2、44例t(8;21)/AML1-ETO9a阳性AML-M2患者,根据免疫学特征,40例单纯表达髓系抗原,3例同时表达髓系和B淋巴系抗原,1例未检测。染色体核型结果示单纯t(8;21)17例(38.64%);有附加染色体异常27例(61.36%),其中伴性染色体缺失(-Y或-X)的19例(43.18%),主要是Y染色体的缺失(13例),伴其他染色体异常8例(18.18%)。本组患者初诊时白细胞计数(WBC)中位值为9.05(1.5-35.5)×109/L;白细胞指数中位值为4.1;血红蛋白(Hb)中位值为72.5(36-145) g/L;血小板(PLT)计数中位值为31.5(3-238)×109/L;乳酸脱氢酶(LDH)中位值为395(100-1572.6)U/L。44例住院患者中,15例有不同程度的肝脾淋巴结等髓外浸润,2例有中枢神经系统(CNS)的浸润。初诊时AE9a在AE及AE9a两者总和中所占的百分比与患者高白细胞血症、高白细胞指数及染色体的伴随异位影响患者预后的高危因素并无相关性。缓解期间AE9a百分比≥30%的患者复发率明显高于AE9a百分比<30%患者(p<0.01),诱导CR后AE9a百分比高水平组(≥30%)无复发生存时间(RFS)较短(p<0.05)。结论1、AE9a与AE共表达于具有t(8;21)的AML-M2中,并且AE表达量高于AE9a,两者具有明显的正相关性。AE9a异构体对标准化疗的敏感性较AE差。2、t(8;21)/ AML1-ETO9a阳性AML-M2标准化疗后缓解率低,缓解期间AE9a百分比≥30%的患者复发率高,RFS短。3、初诊时AE9a在AE及AE9a两者总和中所占的百分比与患者高白细胞血症、高白细胞指数及染色体的伴随异位影响患者预后的高危因素并无相关性。4、在缓解期监测AE9a在AE及AE9a两者总体中百分比的变化比单独监测AE融合基因能更早的预示疾病复发趋势,从而可提前进行临床干预,降低患者的复发率,提高患者的长期生存率。二、AML1-ETO9a异构体与C-KIT突变在伴t(8;21) AML-M2中的分析目的1、检测伴t(8;21)AML-M2初诊和复发患者C-KIT基因突变发生情况,并分析其临床特征及对临床预后的影响。2、监测伴有t(8;21)AML-M2初诊患者AML1-ETO9a百分比,研究其在伴t(8;21)AML-M2中与C-KIT突变的相关性,从而进一步分析两者对预后的影响。方法1、应用cDNA-聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增55例初诊和15例复发伴t(8;21)AML-M2患者C-KIT基因第8和17号外显子,将PCR产物进行基因测序。2、分析55例t(8;21) AML-M2初诊患者的临床和实验室资料,了解C-KIT基因突变阳性患者的临床特征。3、应用real-time PCR技术监测此55例初诊标本中AE9a在AE9a与AE两者总和中百分比的变化,结合临床资料,分析AML1-ETO9a与C-KIT的相关性及对预后的影响。结果1、55例伴t(8;21)AML-M2初诊患者共检出13例(23.6%)发生了C-KIT基因突变(mutKIT),且均为17号外显子突变(mutated KIT in 17 exon,mutKIT17)。C-KIT突变主要表现为点突变,其中最常见的是位于C-KIT激酶功能域的D816突变(53.8%)。15例伴t(8;21)AML-M2复发患者共检出8例(53.3%)发生了mutKIT,均为mutKIT17,并且mutKIT17亦主要发生在密码子D816上(7/8)。伴t(8;21)AML-M2复发患者mutKIT发生率高于初诊患者(P<0.05)。2、MutKIT与野生型(wide-type C-KIT,wtKIT)组患者相比较,前者的附加染色体核型比例较高(P<0.05),两组的外周血白细胞、血红蛋白水平、血小板计数、骨髓原始细胞比例、CD117表达水平、LDH水平以及年龄、性别的差异均无统计学意义(P>0.05)。MutKIT组患者的2年RFS率(30.9%)和2年OS率(32.1%)均明显低于wtKIT组(RFS率53.2%与OS率71.6%,P<0.05)。3、13例初诊mutKIT患者都出现在AML1-ETO9a阳性的患者标本中,且mutKIT组AE9a百分比明显高于wtKIT组(P<0.05),即mutKIT与AE9a具有相关性。结论1、伴t(8;21)AML-M2患者中C-KIT基因第17号外显子的突变类型多样,其中C-KIT基因密码子D816突变较多见。伴t(8;21)AML-M2复发患者mutKIT发生率高于初诊患者。2、MutKIT患者往往伴随附加染色体异常,CD117表达水平与mutKIT状态无相关性;伴有mutKIT的患者易复发,生存时间短,预后差。3、MutKIT与AE9a具有相关性,两者与伴t(8;21)AML-M2患者预后密切相关。