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本试验以猪肠上皮细胞作为受试对象,以槲皮素作为受试物,将槲皮素溶解在二甲基亚砜(DMSO)中,通过在细胞培养液中添加0.2%DMSO及不同浓度的槲皮素,探讨槲皮素对猪肠上皮细胞利用蛋白质的作用及机制。试验结果表明:(1)与对照组相比,0.001~1 mg/L槲皮素均能促进细胞增殖,其中1 mg/L槲皮素作用效果最好。在上述试验基础上,对槲皮素的适宜浓度进一步筛选。发现24~144 h内,槲皮素的半数有效浓度分别为0.50、4.17、1.10、2.08、3.52、5.43 mg/L。(2)通过BCA法检测细胞内蛋白质含量发现,与对照组相比,槲皮素作用24 h时,试验各组间无显著差异(P>0.05);作用48 h时,0.4、0.8、1.6 mg/L槲皮素组细胞内蛋白质含量显著增加(P<0.05);作用72 h时,0.4 mg/L槲皮素组细胞内蛋白质含量显著增加(P<0.05)。(3)通过荧光定量法检测细胞内转运载体表达发现,与对照组相比,1.6 mg/L槲皮素作用24 h可极显著提高载体ASCT2、ATA2、rBAT、小肽转运载体mRNA表达(P<0.01);作用48 h,可极显著提高载体rBAT、y~+LAT1、y~+LAT2 mRNA表达(P<0.01),显著提高小肽转运载体mRNA表达(P<0.05);作用72 h,可极显著提高载体EAAC1、ASCT2、ATA2、LAT2、CAT-1、rBAT、y~+LAT1 mRNA表达(P<0.01),显著提高小肽转运载体mRNA表达(P<0.05)。结果表明,1.6 mg/L槲皮素作用效果较显著,能促进氨基酸、小肽转运载体表达。(4)通过荧光定量法检测细胞内信号通路表达发现,与对照组相比,作用24 h时,1.6mg/L槲皮素可显著提高结节性硬化复合物1(TSC1)mRNA表达(P<0.05),极显著提高雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、真核起始因子结合蛋白1(4E-BP1)、真核起始因子4B(eIF4B)、真核起始因子4A(eIF4A)、核糖体蛋白S6(RPS6)mRNA表达(P<0.01);作用48 h时,显著提高真核起始因子4E(eIF4E)mRNA表达(P<0.05),极显著提高4E-BP1、核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)mRNA基因表达(P<0.01);作用72 h时,极显著提高mTOR、4E-BP1、eIF4E、eIF4B、eIF4A、RPS6 mRNA表达(P<0.01)。(5)通过Western Blot试验发现,与对照组相比,1.6 mg/L槲皮素极显著提高mTOR、eIF4A、eIF4E蛋白表达,极显著降低4E-BP1蛋白表达(P<0.01)。1.6 mg/L槲皮素作用效果较显著,可通过提高信号通路蛋白在mRNA、蛋白水平的表达,激活mTOR信号通路,促进细胞内蛋白质的合成。综上所述,培养液中添加1.6 mg/L槲皮素能促进细胞增殖,提高细胞内蛋白质含量,此作用可能是通过促进氨基酸和小肽转运载体表达以及激活mTOR信号通路来实现的。