七鳃鳗CD82的分子克隆及生物信息学分析

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CD82分子为四次跨膜超家族(transmembrane4super-family,TM4SF)的代表成员,表达在人体的许多组织中,可以广泛参与细胞的生长,粘附,凋亡等多种生命活动,在进化上高度保守。七鳃鳗作为最为原始的无颌类脊椎动物,是沟通无脊椎动物和脊椎动物的桥梁,追寻脊椎动物的免疫起源和进化发展的模式生物。目前主要针对高等脊椎动物的CD82研究比较集中,而对于一些较为低等的无颌类脊椎动物的研究甚少,尚不清楚CD82具备哪些功能及相应的调节机制。从日本七鳃鳗免疫小体cDNA文库中筛选出一条与哺乳动物的CD82分子具有很高同源性的EST序列,利用Primer5.0软件自行设计引物,采取基因克隆方法得到了CD82基因的编码区序列,开放阅读框长度为801bp的七鳃鳗CD82基因,编码266个氨基酸。生物信息学分析表明,CD82具有四个跨膜结构域(TM1-TM4),TM1和TM2之间形成了一个小的胞外环EC1,TM3和TM4组成一个大的胞外环EC2,EC2上有3个潜在的N型糖基化位点。利用blast、Biodit对不同的物种的CD82进行序列比对,此外,也对CD82高级结构、抗原表位和保守基序的分布等也进行了预测和分析,七鳃鳗CD82处于最原始的进化地位,基本遵循生物由低等到高等的进化顺序。采用半定量RT-PCR法检测CD82基因在日本七鳃鳗不同组织广泛表达,尤其在白细胞,肾脏中的丰度最高,在免疫小体,鳃等组织中也稳定表达,心脏中表达量最低。使用菌液免疫七鳃鳗后,CD82的表达水平在心脏,肝脏和白细胞中明显上调,表明CD82在参与七鳃鳗的免疫系统信号转导中发挥着重要的作用,这为以后更好的研究七鳃鳗的进化和免疫应答奠定了理论基础。
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