兰香草总黄酮提取、纯化工艺及其体外抑菌活性研究

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本课题对兰香草总黄酮的检测方法、提取及分离纯化工艺、体外抑菌活性等进行了研究,建立了一条兰香草黄酮的提取、纯化工艺路线并对其中各项工艺参数进行了优化。主要研究成果如下:(1)采用紫外-可见分光光度法检测兰香草提取液中黄酮浓度,并对检测方法进行了方法学考察。结果得到回归方程y=0.0115x-0.0026,相关系数R2=0.9996,表明芦丁在0-55μg/mL范围内线性关系良好;标准品和供试品溶液稳定性试验RSD分别为1.54%、1.66%:精密度和重复性试验RSD分别为0.93%、1.50%;加样回收试验平均回收率为98.42%,RSD为1.44%,表明该方法具有较好的稳定性和重复性,方法准确、可靠。(2)运用PB筛选和BBD设计、优化,得到一条兰香草总黄酮超声提取的工艺路线:’乙醇浓度73%,超声时间32min,液料比45mL/g,在此条件下提取率为5.04%。与传统的乙醇浸提法相比,超声波法节约溶剂,具有较高的效率,优势较为明显,具有一定的推广价值。(3)经过静态吸附及解吸试验结果表明,H-327B型树脂是一种对兰香草黄酮的分离纯化理想的树脂。对该树脂分离过程工艺参数通过优化得到的工艺条件为:以黄酮浓度为9mg/mL的原料液上柱,上柱速率为3BV/h,充分饱和后,以5BV的75%EtOH为洗脱剂进行洗脱。收集洗脱液,减压蒸干溶剂后,干燥即得兰香草黄酮。经纯化后兰香草黄酮纯度由12.14%增加到63.11%,纯化效果显著。(4)由体外抑菌试验结果表明,兰香草黄酮有一定的抗菌活性,具有一定的药用开发价值。经纯化后的兰香草黄酮抑菌试验中所用到的4种细菌的抑菌圈均有较大程度的增加,四种细菌的MIC及MBC均有所减少,证明经纯化处理,对提升兰香草黄酮的抑菌活性是很有帮助的。
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