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miR-34家族是一类高度保守的miRNA，在细胞中发挥重要调控作用，包括细胞周期阻滞、促进细胞衰老、诱导细胞凋亡、阻止细胞迁移等。近年来的研究表明，miR-34与肿瘤关系密切。在多种类型肿瘤中证实miR-34表达缺失或显著下调，与肿瘤细胞恶性增殖、侵袭转移等直接相关。因而，miR-34已成为肿瘤靶向治疗的重要靶点。 有意思的是，miR-34家族与肿瘤抑制蛋白P53高度相关。一方面，P53可直接调控miR-34的转录，实现对多个原癌基因如Bcl-2、c-myc以及细胞因子如cyclinE2、cyclinD1和c-Met的抑制，进而发挥抑癌作用；另一方面miR-34家族也可以通过抑制SIRT1来进一步增强P53的活性，发挥对P53的正反馈调节作用。然而，同样作为具有良好基因治疗前景的靶标，P53与miR-34的治疗作用孰优孰劣，同时恢复P53与miR-34的表达是否具有协同效应，这些问题仍待探究。 在本课题中，我们利用非增殖型腺病毒载体分别表达miR-34a及P53，共表达P53与miR-34a，构建Ad5-miR-34a、Ad5-miR-P53、Ad5-miR-P53-miR-34a，比较miR-34、P53及P53-miR-34a对肝癌细胞的体内外抗肿瘤作用。 RT-PCR结果显示：Ad5-miR-34a感染细胞后（MOI=20），miR-34a的表达量增强约17倍，但未使P53的表达量明显增加；Ad5-P53感染细胞后，P53的表达量提高200倍，同时诱导miR-34a的表达量提高约20倍。而Ad5-P53-miR-34a感染细胞后，miR-34a和P53表达量都没有明显的增加。 MTT杀伤实验表明，Ad5-miR-34a在MOI值为1时，对Huh7细胞产生半数杀伤，而Ad5-P53和Ad5-P53-miR-34a半数杀伤的MOI值分别在3和20；对He p3B、SMMC-7721半数杀伤的MOI值，Ad5-miR-34a、Ad5-P53、Ad5-P53-miR-34a分别为3，10和20。表明对肝癌细胞的杀伤作用，Ad5-miR-34a>Ad5-P53>Ad5-P53-miR-34a。对正常的肝细胞L02，当MOI值为100时，Ad5-miR-34a、Ad5-P53、Ad5-P53-miR-34a均能造成杀伤，但Ad5-P53-miR-34a的杀伤作用相对较强。 体内实验的结果与体外相似，与对照组相比，Ad5-miR-34a和Ad5-P53均能有效抑制Huh7移植瘤的生长，抑制率分别为约60%和18%。 因此，本课题研究证明：对肝癌细胞的治疗作用，miR-34a优于P53，而P53和miR-34a共表达无协同效应，相反可能通过负反馈作用削弱两者的抗癌活性。